人5羥色胺(5-HT)ELISA試劑盒說明書

本試劑盒僅供研究使用,。

藥品名稱：

通用名：人5羥色胺(5-HT)酶聯(lián)免疫分析試劑盒

使用目的：

本試劑盒用于測定人血清，血漿及相關(guān)液體樣本中5羥色胺(5-HT)含量,。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人5羥色胺(5-HT)水平,。用純化的人5羥色胺(5-HT) 抗體包被微孔板，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入5羥色胺(5-HT),，再與HRP標記的5羥色胺(5-HT)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的人5羥色胺(5-HT)呈正相關(guān),。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中人5羥色胺(5-HT)濃度,。 

試劑盒組成 

標本要求 

1．標本采集后盡早進行提取,，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗,，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。

操作步驟

• 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10孔，在*,、第二孔中分別加標準品100μl,，然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻,；然后從*孔,、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三,、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,，再各取50μl分別加到第五,、第六孔中，再在第五,、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,，混勻；混勻后從第五,、第六孔中各取50μl分別加到第七,、第八孔中，再在第七,、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九,、第十孔中,，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉,。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為1800ng/L,，1200ng/L ,，600ng/L，300ng/L,， 150ng/L）,。
• 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）,、待測樣品孔,。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,。
• 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。   
• 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
• 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去，如此重復5次,，拍干,。
• 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外,。 
• 溫育：操作同3,。
• 洗滌：操作同5。
• 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
• 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）,。
• 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行,。

計算

  以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標,，在坐標紙上繪出標準曲線,，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù),，即為樣品的實際濃度。 

注意事項

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未用完,，板條應裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結(jié)果。

3．各步加樣均應使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準確性,，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),，如標本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣。

• 請每次測定的同時做標準曲線，做復孔,。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。
• 封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染。

6．底物請避光保存,。

7．嚴格按照說明書的操作進行,，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理,。

9．本試劑不同批號組分不得混用,。

10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準,。

檢測范圍：

100ng/L -2000ng/L

規(guī)格：

96人份/盒

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：,；2-8℃。

2．有效期：6個月