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人抗核周因子抗體（APF）ELISA試劑盒使用說明書

時間：2010/6/29閱讀：560

人抗核周因子抗體（APF）ELISA試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用,。

藥品名稱：

通用名：人抗核周因子抗體（APF）酶聯(lián)免疫分析試劑盒

使用目的：

本試劑盒用于測定人血清,，血漿及相關液體樣本中抗核周因子抗體（APF）含量,。

實驗原理

本試劑盒應用間接法測定標本中人抗核周因子抗體（APF）水平,。用純化的人核周因子抗原包被微孔板,，制成固相抗原,，往包被抗原的微孔中依次加入已知濃度的抗核周因子抗體（APF）標準品和未知濃度的抗核周因子抗體（APF）待檢樣品,，溫育后，加入生物素標記的抗IgG抗體,，再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合,，形成免疫復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的抗核周因子抗體（APF）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）,，通過標準曲線計算樣品中人抗核周因子抗體（APF）濃度,。

試劑盒組成

1	20倍濃縮洗滌液	50ml×1瓶	9	標準品S1（72 ng/L）	0.5ml×1瓶
2	鏈霉親和素-HRP	6ml×1瓶		標準品S2（48 ng/L）	0.5ml×1瓶
3	酶標包被板	12孔×8條		標準品S3（24 ng/L）	0.5ml×1瓶
4	生物素標記的抗-IgG抗體	6ml×1瓶		標準品S4（12 ng/L）	0.5ml×1瓶
5	顯色劑A液	6ml×1瓶		標準品S5（6ng/L）	0.5ml×1瓶
6	顯色劑B液	6ml×1/瓶	10	密封袋	1個
7	終止液	6ml×1瓶	11	封板膜	3張
8	樣品稀釋液	6ml×1瓶	12	說明書	1份

標本要求

1．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。

2．標本采集后盡早進行提取,，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗,，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

操作步驟

1. 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),。每個標準品和空白孔建議做復孔,。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復孔的盡量做復孔,。

2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品,，生物素標記的抗-IgG抗體，鏈霉親和素-HRP,，其余各步與樣品操作相同）,、標準品孔、待測樣品孔,。然后在標準品孔中加入標準品50μl,，在樣本反應孔中先加入待測樣品10μl再加入樣品稀釋液40μl（樣品zui終稀釋度為5倍），蓋上封板膜,，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育45分鐘。

3. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

4. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去,，如此重復4次，拍干,。

5. 加生物素標記的抗-IgG抗體：每孔加入生物素標記的抗-IgG抗體50μl,。37℃溫育30分鐘

6. 洗滌：操作同4。

7. 加鏈霉親和素-HRP：每孔加入50μl的鏈酶親和素-HRP,，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育30分鐘。

8. 洗滌：操作同4,。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl,，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測定：以空白空調(diào)零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

計算

以標準物的濃度為橫坐標,，OD值為縱坐標,，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值待入方程式,，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度,。

注意事項

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存,。

2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果,。

3．各步加樣均應使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差,。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣,。

4．如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值）,，請先將樣本稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以稀釋倍數(shù)（×5×n）,。

5．封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染。

6．本試劑不同批號組分不得混用,。顯色劑B請避光保存,。

7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理,。

9. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。

線形范圍：

4ng/L-80ng/L

規(guī)格：

96人份/盒

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：,；2-8℃,。

2．有效期：6個月

廈門慧嘉生物科技有限公司專業(yè)代理眾多生命科學領域的。致力于各種ELISA試劑盒,、免疫組化試劑盒,、一抗二抗、細胞因子,、生物試劑,、移液器、耗材的銷售推廣及服務工作,。
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