試劑盒使用說明書

廈門慧嘉生物科技有限公司

本試劑盒僅供研究使用,。

藥品名稱：

通用名：大鼠甲狀腺過氧化物酶（TPO）酶聯(lián)免疫分析試劑盒

使用目的：

本試劑盒用于測定大鼠血清,，血漿及相關(guān)液體樣本中甲狀腺過氧化物酶（TPO）含量,。

實(shí)驗原理

本試劑盒應(yīng)用間接法測定標(biāo)本中大鼠甲狀腺過氧化物酶（TPO）水平。用純化的大鼠甲狀腺過氧化物酶（TPO）抗體包被微孔板，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入已知濃度的甲狀腺過氧化物酶（TPO）標(biāo)準(zhǔn)品和未知濃度的甲狀腺過氧化物酶（TPO）待檢樣品,，溫育后,，加入生物素標(biāo)記的抗IgG抗體，再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合,，形成免疫復(fù)合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的甲狀腺過氧化物酶（TPO）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）,，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中大鼠甲狀腺過氧化物酶（TPO）濃度,。 

試劑盒組成 

標(biāo)本要求 

1．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。

2．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗,。若不能馬上進(jìn)行試驗,，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

操作步驟

1. 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔,。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔,。

2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品,，生物素標(biāo)記的抗-IgG抗體，鏈霉親和素-HRP,，其余各步操作相同）,、標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測樣品孔,。然后在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μl,，在樣本反應(yīng)孔中先加入待測樣品10μl再加入樣品稀釋液40μl（樣品zui終稀釋度為5倍），蓋上封板膜,，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育45分鐘,。

3. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

4. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去,，如此重復(fù)4次,，拍干。

5. 加生物素標(biāo)記的抗-IgG抗體：每孔加入生物素標(biāo)記的抗-IgG抗體50μl（空白孔除外）,。37℃溫育30分鐘

6. 洗滌：操作同4。

7. 加鏈霉親和素-HRP：每孔加入50μl的鏈酶親和素-HRP（空白孔除外）,，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育30分鐘。

8. 洗滌：操作同4,。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl,，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測定：以空白空調(diào)零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

計算

  以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),，OD值為縱坐標(biāo),，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值待入方程式,，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度,。 

注意事項

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。

2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果,。

3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),，如標(biāo)本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣。

4． 如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值）,，請先將樣本稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定,，計算時請zui后乘以稀釋倍數(shù)（×5×n）。

5． 封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染,。

6．本試劑不同批號組分不得混用。顯色劑B請避光保存,。

7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。

9. 如與英文說明書有異,，以英文說明書為準(zhǔn)。

檢測范圍：

2.5 ng/ml-40ng/ml

靈敏度：

1.25 ng/ml

規(guī)格：

96人份/盒

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：,；2-8℃,。

2．有效期：6個月