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人組織多肽抗原 人組織多肽抗原 人組織多肽抗原 人組織多肽抗原（TPA）酶聯(lián)免疫分析 酶聯(lián)免疫分析 酶聯(lián)免疫分析 酶聯(lián)免疫分析
試劑盒使用說(shuō)明書(shū) 試劑盒使用說(shuō)明書(shū) 試劑盒使用說(shuō)明書(shū) 試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
本試劑盒僅供研究使用 本試劑盒僅供研究使用 本試劑盒僅供研究使用 本試劑盒僅供研究使用
產(chǎn)品編號(hào) 產(chǎn)品編號(hào) 產(chǎn)品編號(hào) 產(chǎn)品編號(hào)： ：： ：CSB-E04780h
檢測(cè)范圍 檢測(cè)范圍 檢測(cè)范圍 檢測(cè)范圍： ：： ：3.12 mU/ml - 200 mU/ml
zui低檢測(cè)限 zui低檢測(cè)限 zui低檢測(cè)限 zui低檢測(cè)限： ：： ：0.78 mU/ml
特異性 特異性 特異性 特異性： ：： ：本試劑盒可同時(shí)檢測(cè)天然或重組的人 TPA,，且與其他相關(guān)蛋白無(wú)
交叉反應(yīng)。
有效期 有效期 有效期 有效期： ：： ：6 個(gè)月
預(yù)期應(yīng)用 預(yù)期應(yīng)用 預(yù)期應(yīng)用 預(yù)期應(yīng)用： ：： ：ELISA 法定量測(cè)定人血清,、血漿或其它相關(guān)生物液體中 TPA
含量,。
說(shuō)明 說(shuō)明 說(shuō)明 說(shuō)明  
1.  試劑盒保存：未開(kāi)封的試劑盒應(yīng)儲(chǔ)存于 2-8℃；開(kāi)封后的酶標(biāo)板應(yīng)與干燥
劑一起儲(chǔ)存于鋁箔袋中置于 2-8℃保存,。僅在此出儲(chǔ)存條件下,，產(chǎn)品在有
效期內(nèi)可正常使用。
2.  濃洗滌液低溫保存會(huì)有鹽析出,，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,。  
3.  中、英文說(shuō)明書(shū)可能會(huì)有不一致之處,，請(qǐng)以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn),。
4.  剛開(kāi)啟的酶聯(lián)板孔中可能會(huì)含有少許水樣物質(zhì)，此為正?，F(xiàn)象,，不會(huì)對(duì)實(shí)
驗(yàn)結(jié)果造成任何影響。   2
實(shí)驗(yàn)原理 實(shí)驗(yàn)原理 實(shí)驗(yàn)原理 實(shí)驗(yàn)原理
用純化的抗體包被微孔板,，制成固相載體,，往包被抗 TPA 抗體的微孔中
依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化的抗 TPA 抗體,、HRP 標(biāo)記的親和素,，經(jīng)過(guò)
*洗滌后用底物 TMB 顯色。TMB 在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并
在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的 TPA 呈正相關(guān)。用
酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值）,，計(jì)算樣品濃度,。  
試劑盒組成及試劑配制 試劑盒組成及試劑配制 試劑盒組成及試劑配制 試劑盒組成及試劑配制  
1.  酶聯(lián)板 酶聯(lián)板 酶聯(lián)板 酶聯(lián)板（Assay plate ）：                                                              一塊 （96孔）。   
2.  標(biāo)準(zhǔn)品 標(biāo)準(zhǔn)品 標(biāo)準(zhǔn)品 標(biāo)準(zhǔn)品 （Standard）：                                                                   2 瓶（凍干品）,。 
3.  樣品稀釋液 樣品稀釋液 樣品稀釋液 樣品稀釋液（Sample Diluent）：                                                     1×20ml/瓶,。 
4.  生物素標(biāo)記抗體稀釋液 生物素標(biāo)記抗體稀釋液 生物素標(biāo)記抗體稀釋液 生物素標(biāo)記抗體稀釋液（ （（ （Biotin-antibody Diluent） ）） ）：               1×10ml/瓶。 
5.  辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 （ （（ （HRP-avidin Diluent） ）） ）     1×10ml/瓶,。 
6.  生物素標(biāo)記抗體 生物素標(biāo)記抗體 生物素標(biāo)記抗體 生物素標(biāo)記抗體 （ （（ （Biotin-antibody） ）） ）：                           1×120µl/瓶（1： 100）,。 
7.  辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素 （ （（ （HRP-avidin） ）） ）：             1×120µl/瓶（1： 100）。 
8.  底物溶液 底物溶液 底物溶液 底物溶液 （ （（ （TMB Substrate） ）） ）：                                                       1×10ml/瓶,。   
9.  濃洗滌液 濃洗滌液 濃洗滌液 濃洗滌液（ （（ （Wash Buffer） ）） ）  1×20ml/瓶,，使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋 25 倍,。   
10. 終止液 終止液 終止液 終止液（ （（ （Stop Solution） ）） ）：                                                            1×10ml/瓶,。 
需要而未提供的試劑和器材 需要而未提供的試劑和器材 需要而未提供的試劑和器材 需要而未提供的試劑和器材
1.  標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀
2.  高速離心機(jī)
3.  電熱恒溫培養(yǎng)箱
4.  干凈的試管和 Eppendof 管
5.  系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭，一次檢測(cè)樣品較多時(shí),，用多通道移液器
6.  蒸餾水,，容量瓶等   3
標(biāo)本的采集及保存 標(biāo)本的采集及保存 標(biāo)本的采集及保存 標(biāo)本的采集及保存  
1.  血清：全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜后于1000g離心20分鐘,，
取上清即可立即檢測(cè)；或進(jìn)行分裝,，并將標(biāo)本放于-20℃或-80℃保存,，但
應(yīng)避免反復(fù)凍融。解凍后的樣品應(yīng)再次離心,，然后檢測(cè),。
2.  血漿：可用 EDTA 或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后 30 分鐘內(nèi)于 2  -  8°C
1000 g離心 15 分鐘,，取上清即可立即檢測(cè),；或進(jìn)行分裝，并將標(biāo)本放于
-20℃或-80℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。解凍后的樣品應(yīng)再次離心，然后
檢測(cè),。
3.  細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：1000g離心 20 分鐘,，取上清即可立即
檢測(cè)；或進(jìn)行分裝,，并將標(biāo)本放于-20℃或-80℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
解凍后的樣品應(yīng)再次離心,，然后檢測(cè),。
注 注注 注： ：： ：標(biāo)本溶血會(huì)影響zui后檢測(cè)結(jié)果 標(biāo)本溶血會(huì)影響zui后檢測(cè)結(jié)果 標(biāo)本溶血會(huì)影響zui后檢測(cè)結(jié)果 標(biāo)本溶血會(huì)影響zui后檢測(cè)結(jié)果， ,，,， ，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè) 因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè) 因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè) 因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè),。 ,。。 ,。
標(biāo)本的稀釋原則 標(biāo)本的稀釋原則 標(biāo)本的稀釋原則 標(biāo)本的稀釋原則： ：： ：
首先通過(guò)文獻(xiàn)檢索的方式了解待測(cè)樣本的大致含量,，確定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)。
只有稀釋至標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍內(nèi),，檢測(cè)的結(jié)果才是準(zhǔn)確的,。稀釋的過(guò)程中，應(yīng)
做好詳細(xì)的記錄,。zui后計(jì)算濃度時(shí),，稀釋了“N”倍，標(biāo)本的濃度應(yīng)再乘以“N”,。 
標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋原則 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋原則 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋原則 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋原則： ：： ：2 瓶,，使用前于 6000-10000rpm 離心 30 秒,。 每
瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至 1ml，蓋好后靜置 10 分鐘以上,，然后反復(fù)顛倒
/搓動(dòng)以助溶解,，其濃度為 200  mU/ml，做系列倍比稀釋后,，分別稀釋 200
mU/ml,  100 mU/ml,  50 mU/ml, 25 mU/ml, 12.5 mU/ml,  6.25 mU/ml,  3.12
mU/ml,，樣品稀釋液直接作為標(biāo)準(zhǔn)濃度 0 mU/ml，臨用前 15 分鐘內(nèi)配制,，用
完丟棄,，下次檢測(cè)使用新鮮配置的標(biāo)準(zhǔn)品。
如配制 100  mU/ml 標(biāo)準(zhǔn)品：取 0.5ml（不要少于 0.5ml）200  mU/ml 的上述
標(biāo)準(zhǔn)品加入含 0.5ml 樣品稀釋液的 Eppendorf 管中,，混勻即可,，其余濃度以
此類推。   4
生物素標(biāo)記抗體的稀釋原則 生物素標(biāo)記抗體的稀釋原則 生物素標(biāo)記抗體的稀釋原則 生物素標(biāo)記抗體的稀釋原則： ：： ：
打開(kāi)瓶蓋前請(qǐng)離心,，收集瓶壁上的溶液,。臨用前以生物素標(biāo)記抗體稀釋液稀
釋，稀釋前根據(jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制（每孔 100µl）,，實(shí)際
配制時(shí)應(yīng)多配制 0.1-0.2ml,。如 10µl生物素標(biāo)記抗體加 990µl生物素標(biāo)記抗體
稀釋液的比例配制，輕輕混勻,，在使用前一小時(shí)內(nèi)配制,。
辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素的稀釋原則 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素的稀釋原則 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素的稀釋原則 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素的稀釋原則： ：： ：
打開(kāi)瓶蓋前請(qǐng)離心，收集瓶壁上的溶液,。臨用前以辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和
素稀釋液稀釋,，稀釋前根據(jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制（每孔
100µl），實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制 0.1-0.2ml,。如10µl辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素
加 990µl 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 的比例配制,，輕輕混勻，在使用
前一小時(shí)內(nèi)配制,。
操作步 操作步 操作步 操作步驟 驟驟 驟
實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,，請(qǐng)?zhí)崆芭渲煤盟性噭噭┗驑悠废♂寱r(shí),，均需混勻,，混勻
時(shí)盡量避免起泡。每次檢測(cè)都應(yīng)該做標(biāo)準(zhǔn)曲線,。如樣品濃度過(guò)高時(shí),，用樣品
稀釋液進(jìn)行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍,。加樣時(shí),，槍頭應(yīng)直接對(duì)
準(zhǔn)液面,，切勿沿孔壁加樣,。
1.  加樣：分別設(shè)空白孔,、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔,?？瞻卓准訕悠废♂屢?100µl，
余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品 100µl,，注意不要有氣泡,，加樣將樣品加于
酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動(dòng)混勻,，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，
37℃反應(yīng) 120 分鐘,。
為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。   5
2.  棄去液體,，甩干,，不用洗滌。每孔加生物素標(biāo)記抗體工作液  100µl （取 1µl
生物素標(biāo)記抗體加 99µl 生物素標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制,，輕輕混勻,，
在使用前一小時(shí)內(nèi)配制），37 ,60 ℃ 分鐘,。
3.  溫育 60 分鐘后,，棄去孔內(nèi)液體，甩干,，洗板 3 次,，每次浸泡 1-2分鐘，
200µl/每孔,，甩干,。  
4.  每孔加辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素工作液（同生物素標(biāo)記抗體工作液）
100µl，37℃,，60 分鐘,。
5.  溫育 60 分鐘后，棄去孔內(nèi)液體,，甩干,，洗板 5 次，每次浸泡 1-2分鐘,，
200µl/每孔,，甩干,。
6.  依序每孔加底物溶液 90µl，37℃避光顯色（ （（ （30 分鐘內(nèi),，此時(shí)肉眼可見(jiàn)標(biāo)
準(zhǔn)品的前 3-4 孔有明顯的梯度藍(lán)色,，后 3-4 孔顯色不明顯，即可終止）,。
7.  依序每孔加終止溶液 50µl,，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。終止液的加
入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同,。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,，底
物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8.  用酶聯(lián)儀在 450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度（OD 值）,。 在加終止液
后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行檢測(cè),。
實(shí)驗(yàn)備注 實(shí)驗(yàn)備注 實(shí)驗(yàn)備注 實(shí)驗(yàn)備注
1.  用戶在初次使用試劑盒時(shí)，應(yīng)將各種試劑管離心數(shù)分鐘,，以便試劑集中到
管底,。
2.  每次實(shí)驗(yàn)留一孔作為空白調(diào)零孔，該孔不加任何試劑,，只是zui后加底物溶
液及終止液,。測(cè)量時(shí)先用此孔調(diào) OD值至零。  
3.  為防止樣品蒸發(fā),，試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi),，酶標(biāo)板加上
蓋或覆膜。   6
4.  未使用完的酶標(biāo)板或者試劑,，請(qǐng)于 2-8℃保存,。標(biāo)準(zhǔn)品、生物素標(biāo)記抗體
工作液,、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素工作液請(qǐng)依據(jù)所需的量配置使用,。請(qǐng)
勿重復(fù)使用已稀釋過(guò)的標(biāo)準(zhǔn)品、生物素標(biāo)記抗體工作液,、或辣根過(guò)氧化物
酶標(biāo)記親和素工作液,。
5.  建議檢測(cè)樣品時(shí)均設(shè)雙孔測(cè)定，以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性,。
洗板方法 洗板方法 洗板方法 洗板方法
手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體,；在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上
鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次,；將推薦的洗滌緩沖液至少 0.3ml
注入孔內(nèi),，浸泡 1-2 分鐘。根據(jù)需要，重復(fù)此過(guò)程數(shù)次,。
自動(dòng)洗板：如果有自動(dòng)洗板機(jī),，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過(guò)程中。
計(jì)算 計(jì)算 計(jì)算 計(jì)算
請(qǐng)從我們的下載專業(yè)軟件"Curve Exert 1.3",，并根據(jù)提示制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,。
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)（對(duì)數(shù)坐標(biāo)），OD值為縱坐標(biāo)（普通坐標(biāo)）,，在半對(duì)
數(shù)坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,，根據(jù)樣品的 OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度,；
再乘以稀釋倍數(shù),；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD 值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方
程式，將樣品的 OD 值代入方程式,，計(jì)算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù)，即
為樣品的實(shí)際濃度,。
注意 注意 注意 注意事項(xiàng) 事項(xiàng) 事項(xiàng) 事項(xiàng)
1.  本操作說(shuō)明適用于 本操作說(shuō)明適用于 本操作說(shuō)明適用于 本操作說(shuō)明適用于 48T 試劑盒 試劑盒 試劑盒 試劑盒,， ，,， ,，  48T 試劑盒中酶聯(lián)板 試劑盒中酶聯(lián)板 試劑盒中酶聯(lián)板 試劑盒中酶聯(lián)板、 ,、,、 、標(biāo)準(zhǔn)品 標(biāo)準(zhǔn)品 標(biāo)準(zhǔn)品 標(biāo)準(zhǔn)品,、 ,、、 ,、生物素 生物素 生物素 生物素
標(biāo)記抗體及辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素減半 標(biāo)記抗體及辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素減半 標(biāo)記抗體及辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素減半 標(biāo)記抗體及辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素減半,。 。,。 ,。
2.  當(dāng)混合蛋白溶液時(shí)應(yīng)盡量輕緩，避免起泡,。   7
3.  洗滌過(guò)程非常重要,，不充分的洗滌易造成假陽(yáng)性。
4.  一次加樣時(shí)間控制在 5 分鐘內(nèi),，如標(biāo)本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣。 
5.  請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔,。
6.  如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高,，請(qǐng)先稀釋后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以稀釋
倍數(shù),。
7.  在配制標(biāo)準(zhǔn)品,、檢測(cè)溶液工作液時(shí)，請(qǐng)以相應(yīng)的稀釋液配制,，不能混淆,。 
8.  底物請(qǐng)避光保存。
9.  不要用其它生產(chǎn)廠家的試劑替換試劑盒中的試劑,。

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