人apelin 13（AP13）ELISA試劑盒說明書

本試劑盒僅供研究使用,。

藥品名稱：

通用名：人apelin 13（AP13）酶聯(lián)免疫分析試劑盒

使用目的：

本試劑盒用于測定人血清,，血漿及相關(guān)液體樣本中apelin 13（AP13）含量,。

實驗原理

本試劑盒應(yīng)用間接法測定標(biāo)本中人apelin 13（AP13）水平,。用純化的人apelin 13（AP13）抗體包被微孔板，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入已知濃度的apelin 13（AP13）標(biāo)準(zhǔn)品和未知濃度的apelin 13（AP13）待檢樣品,，溫育后，加入生物素標(biāo)記的抗IgG抗體,，再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合,，形成免疫復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的apelin 13（AP13）呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）,，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中人apelin 13（AP13）濃度。

試劑盒組成

標(biāo)本要求

1．不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。

2．標(biāo)本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行,，提取后應(yīng)盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

操作步驟

1.       根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔,。

2.       加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品，生物素標(biāo)記的抗-IgG抗體,，鏈霉親和素-HRP,，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)品孔,、待測樣品孔,。然后在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μl，在樣本反應(yīng)孔中先加入待測樣品10μl再加入樣品稀釋液40μl（樣品zui終稀釋度為5倍）,，蓋上封板膜,，輕輕振蕩混勻，37℃溫育45分鐘。

3.       配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

4.       洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去,，如此重復(fù)4次,，拍干,。

5.       加生物素標(biāo)記的抗-IgG抗體：每孔加入生物素標(biāo)記的抗-IgG抗體50μl（空白孔除外）。37℃溫育30分鐘

6.       洗滌：操作同4,。

7.       加鏈霉親和素-HRP：每孔加入50μl的鏈酶親和素-HRP（空白孔除外）,，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘,。

8.       洗滌：操作同4,。

9.       顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.

10.   終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）,。

11.   測定：以空白空調(diào)零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行,。

計算

  以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD值待入方程式,，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù),，即為樣品的實際濃度,。

注意事項

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。

2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結(jié)果,。

3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差,。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣,。

4．  如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值）,，請先將樣本稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以稀釋倍數(shù)（×5×n）,。

5．  封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染。

6．本試劑不同批號組分不得混用,。顯色劑B請避光保存,。

7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。

9. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn),。

線形范圍：

150ng/L-4000ng/L  

規(guī)格：

96人份/盒

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：,；2-8℃。

2．有效期：6個月

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