人苯并吡-DNA（PAH-DNA）ELISA試劑盒使用說(shuō)明書(shū) 

    本試劑盒僅供研究使用,。 

藥品名稱(chēng)：

通用名：人苯并吡-DNA（PAH-DNA）酶聯(lián)免疫分析試劑盒

使用目的：

    本試劑盒用于測(cè)定人血清,、血漿中人苯并吡-DNA（PAH-DNA）  含量。

實(shí)驗(yàn)原理

    本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人苯并吡-DNA（PAH-DNA） 水平,。用純化的人苯

并吡-DNA（PAH-DNA） 抗體包被微孔板,，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入人苯

并吡-DNA（PAH-DNA） 再與HRP 標(biāo)記的人苯并吡-DNA（PAH-DNA） 抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原

-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，

并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的人苯并吡-DNA（PAH-DNA） 呈正

相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值）,，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算樣品中人苯并吡

-DNA（PAH-DNA） 濃度,。

試劑盒組成

  1   20 倍濃縮洗滌液           30ml ×1 瓶      7    終止液                 6ml ×1 瓶

  2   酶標(biāo)試劑                6ml ×1 瓶       8    標(biāo)準(zhǔn)品（270ng/L）        0.5ml ×1 瓶

  3   酶標(biāo)包被板               12 孔×8 條       9    標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液              1.5ml×1 瓶

  4   樣品稀釋液               6ml ×1 瓶       10   說(shuō)明書(shū)                 1 份

  5   顯色劑A 液              6ml ×1 瓶       11   封板膜                 2 張

  6   顯色劑B 液              6ml ×1/瓶       12   密封袋                 1 個(gè)

標(biāo)本要求

    1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。若不能

       馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

    2．不能檢測(cè)含 NaN3 的樣品,，因NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP ）活性。

操作步驟

1.  標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔 10 孔,，在*,、第二孔中分別加標(biāo)

    準(zhǔn)品 100μl，然后在*,、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,，混勻；然后從*孔,、第二

    孔中各取 100μl 分別加到第三孔和第四孔,，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,，

    混勻,；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl 棄掉，再各取50μl 分別加到第五,、第六孔

    中,，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,，混勻,；混勻后從第五,、第六孔中各

    取 50μl 分別加到第七、第八孔中,，再在第七,、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl，混

    勻后從第七,、第八孔中分別取 50μl  加到第九,、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)

    品稀釋液50μl,，混勻后從第九第十孔中各取50μl 棄掉,。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，

    濃度分別為 180ng/L,，120ng/L  ,，60ng/L，30ng/L,，  15ng/L ）,。

2.  加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）,、待測(cè)樣

    品孔,。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品 10μl （樣

    品zui終稀釋度為5 倍）,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻,。

3.  溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育30 分鐘,。

4.  配液：將20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水20 倍稀釋后備用

5.  洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置 30 秒后棄去,，如此

    重復(fù)5 次,，拍干,。

6.  加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl,，空白孔除外。

7.  溫育：操作同 3,。

8.  洗滌：操作同 5,。

9.  顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色

    15 分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零,，450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD 值）,。 測(cè)定應(yīng)在加終止

    液后 15 分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。

計(jì)算

    以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),，OD             值為縱坐標(biāo),，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，根據(jù)樣品的

OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)查出相應(yīng)的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD 值計(jì)算出標(biāo)

準(zhǔn)曲線(xiàn)的直線(xiàn)回歸方程式，將樣品的OD 值代入方程式,，計(jì)算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù)，

即為樣品的實(shí)際濃度,。

注意事項(xiàng)

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未

   用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。

2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果,。

3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器,，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差,。一次加樣時(shí)間

   控制在 5 分鐘內(nèi),，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣,。

4．請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本 OD 值

   大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD 值）,，請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測(cè)定,，計(jì)

   算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染,。

6．底物請(qǐng)避光保存。

7．嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9．本試劑不同批號(hào)組分不得混用,。

10.  如與英文說(shuō)明書(shū)有異,，以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn),。

檢測(cè)范圍：

  10ng/L -200ng/L

規(guī)格：

  96 人份/盒

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃,。

2．有效期：6 個(gè)月

廈門(mén)慧嘉生物科技有限公司專(zhuān)業(yè)提供各品牌ELISA試劑盒
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