小鼠肌肝（Cr）ELISA試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

    本試劑盒僅供研究使用,。

藥品名稱(chēng)：

通用名：小鼠肌肝（Cr）酶聯(lián)免疫分析試劑盒

使用目的：

    本試劑盒用于測(cè)定小鼠血清,、血漿中肌肝（Cr）的含量。

實(shí)驗(yàn)原理

    本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中小鼠肌肝（Cr）水平。用純化的抗-肌肝（Cr）

抗體包被微孔板，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中加入肌肝（Cr），再與HRP 標(biāo)記的肌

肝（Cr）抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB 顯色。

TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣

品中的肌肝（Cr）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值）,，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲

線(xiàn)計(jì)算樣品中小鼠肌肝（Cr）的含量,。

試劑盒組成

  1   20 倍濃縮洗滌液           30ml×1 瓶       7    終止液                 6ml×1 瓶

  2   酶標(biāo)試劑                6ml×1 瓶        8    標(biāo)準(zhǔn)品（36μmol/L） 0.5ml×1 瓶

  3   酶標(biāo)包被板               12 孔×8 條       9    標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液              1.5ml×1 瓶

  4   樣品稀釋液               6ml×1 瓶        10   說(shuō)明書(shū)                 1 份

  5   顯色劑A 液              6ml×1 瓶        11   封板膜                 2 張

  6   顯色劑B 液              6ml×1/瓶        12   密封袋                 1 個(gè)

標(biāo)本處理及要求

    1．血清,、血漿標(biāo)本可直接測(cè)定；

    2．不能檢測(cè)含NaN3的樣品,，因NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP ）活性。

    3．采集后盡早進(jìn)行實(shí)驗(yàn),，若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反

       復(fù)凍融,。

操作步驟

1.  標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上按序設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10 孔,，在*、第二孔中分別

    加標(biāo)準(zhǔn)品100μl，然后在*,、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,，混勻,；再各取100μl 分

    別加到第三孔和第四孔,，再在第三,、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl，混勻后,，在第

    三孔和第四孔中先各取50μl 棄掉；再各取50μl 分別加到第五,、第六孔中；再在第五,、

    第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,，混勻；混勻后從第五,、第六孔中各取50μl 分別加

    到第七,、第八孔中；再在第七,、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,，混勻后從第七、

    第八孔中分別取50μl 加到第九,、第十孔中,；再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，

    混勻后從第九第十孔中各取50μl 棄掉,。（稀釋后各孔加樣量都為50μl,，濃度分別為24

    μmol/L，16μmol/L ,，8μmol/L,，4μmol/L，2μmol/L）,。

2.  加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同）、待測(cè)樣

    品孔,。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測(cè)樣品10μl （樣

    品zui終稀釋度為5 倍）,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，輕輕晃動(dòng)混勻,。3.  溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘,。

4.  配液：將20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水20 倍稀釋后備用

5.  洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30 秒后棄去,，如此

    重復(fù)5 次,，拍干。

6.  加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,，空白孔除外,。

7.  溫育：操作同3。

8.  洗滌：操作同5,。

9.  顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色

    15分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零,，450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD 值）,。測(cè)定應(yīng)在加終止

    液后15 分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。

計(jì)算

    以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),，OD              值為縱坐標(biāo),，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，根據(jù)樣品的

OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)查出相應(yīng)的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD 值計(jì)算出標(biāo)

準(zhǔn)曲線(xiàn)的直線(xiàn)回歸方程式，將樣品的OD 值代入方程式,，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù),，

即為樣品的實(shí)際濃度,。

注意事項(xiàng)

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未

   用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。

2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,，洗滌時(shí)不影響結(jié)果,。

3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器,，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差,。一次加樣時(shí)間

   控制在5 分鐘內(nèi),，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣,。

4．請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本OD 值

   大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔OD 值的）,，請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測(cè)定,，計(jì)

   算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

5．嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

6．本試劑不同批號(hào)組分不得混用,。

7．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染,。

8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9．底物請(qǐng)避光保存,。

檢測(cè)范圍：

  1μmol/L -30μmol/L

規(guī)格：

  96 人份/盒

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：,；2-8℃。

2．有效期：6 個(gè)月

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