小鼠尿蛋白（UP）ELISA試劑盒使用說明書

    本試劑盒僅供研究使用,。

藥品名稱：

通用名：小鼠尿蛋白（UP ）酶聯(lián)免疫分析試劑盒

使用目的：

    本試劑盒用于測定小鼠血清、血漿中尿蛋白（UP ）的含量,。

實驗原理

    本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠尿蛋白（UP ）平,。用純化的抗-尿蛋白（UP ）

抗體包被微孔板，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中加入尿蛋白（UP ）,，再與HRP  標記

          UP ）抗體結合,，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB

的尿蛋白（

顯色,。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深

淺和樣品中的尿蛋白（UP）呈正相關,。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值）,，通

過標準曲線計算樣品中小鼠尿蛋白（UP ）的含量。

試劑盒組成

  1   20 倍濃縮洗滌液           30ml×1 瓶       7    終止液                 6ml×1 瓶

  2   酶標試劑                6ml×1 瓶        8    標準品（225μmol/L） 0.5ml×1 瓶

  3   酶標包被板               12 孔×8 條       9    標準品稀釋液              1.5ml×1 瓶

  4   樣品稀釋液               6ml×1 瓶        10   說明書                 1 份

  5   顯色劑A 液              6ml×1 瓶        11   封板膜                 2 張

  6   顯色劑B 液              6ml×1/瓶        12   密封袋                 1 個

標本處理及要求

    1．血清,、血漿標本可直接測定,；

    2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP ）活性,。

    3．采集后盡早進行實驗,，若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存,，但應避免反

       復凍融,。

操作步驟

1.  標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上按序設標準品孔10 孔，在*,、第二孔中分別

    加標準品100μl,，然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl,，混勻,；再各取100μl 分

    別加到第三孔和第四孔，再在第三,、第四孔分別加標準品稀釋液 50μl,，混勻后,，在第

    三孔和第四孔中先各取50μl 棄掉,；再各取50μl 分別加到第五、第六孔中,；再在第五,、

    第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻,；混勻后從第五、第六孔中各取50μl 分別加

    到第七,、第八孔中；再在第七,、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,，混勻后從第七,、

    第八孔中分別取50μl 加到第九,、第十孔中,；再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,，

    混勻后從第九第十孔中各取50μl 棄掉,。（稀釋后各孔加樣量都為50μl,，濃度分別為150

    μmol/L,，100μmol/L ,，50μmol/L,，25μmol/L,，12.5μmol/L）。

2.  加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）、待測樣

    品孔,。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl （樣

    品zui終稀釋度為5 倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部，輕輕晃動混勻,。3.  溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘,。

4.  配液：將20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水20 倍稀釋后備用

5.  洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置30 秒后棄去,，如此

    重復5 次，拍干,。

6.  加酶：每孔加入酶標試劑50μl,，空白孔除外,。

7.  溫育：操作同3。

8.  洗滌：操作同5,。

9.  顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色

    15分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測定：以空白空調(diào)零,，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）,。測定應在加終止

    液后15 分鐘以內(nèi)進行。

計算

    以標準物的濃度為橫坐標,，OD              值為縱坐標,，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的

OD 值由標準曲線查出相應的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標準物的濃度與OD 值計算出標

準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD 值代入方程式,，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù)，

即為樣品的實際濃度,。

注意事項

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未

   用完,，板條應裝入密封袋中保存,。

2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結果,。

3．各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性,，以避免試驗誤差,。一次加樣時間

   控制在5 分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣,。

4．請每次測定的同時做標準曲線，做復孔,。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD 值

   大于標準品孔*孔OD 值的）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定，計

   算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。

5．嚴格按說明書的操作進行,，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

6．本試劑不同批號組分不得混用,。

7．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染,。

8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9．底物請避光保存,。

檢測范圍：

  5μmol/L -200μmol/L

規(guī)格：

  96 人份/盒

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：,；2-8℃。

2．有效期：6 個月

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