小鼠透明質(zhì)酸（HA）ELISA試劑盒使用說明書

    本試劑盒僅供研究使用,。

藥品名稱：

通用名：小鼠透明質(zhì)酸（HA）酶聯(lián)免疫分析試劑盒

使用目的：

    本試劑盒用于測定小鼠血清,、血漿、或其它相關(guān)組織液中透明質(zhì)酸（HA）含量,。

實驗原理

    本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中小鼠透明質(zhì)酸（HA）水平,。用純化的小鼠透明質(zhì)

酸（HA）抗體包被微孔板,，往微孔中依次加入透明質(zhì)酸（HA），再與HRP 標記的透明質(zhì)酸（HA）

抗體結(jié)合,，形成免疫復(fù)合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下

轉(zhuǎn)化成藍色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的透明質(zhì)酸（HA）呈

正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值）,，通過標準曲線計算樣品中小鼠透

明質(zhì)酸（HA）濃度,。

試劑盒組成

  1   20 倍濃縮洗滌液           30ml×1 瓶       7    終止液                 6ml×1 瓶

  2   酶標試劑                6ml×1 瓶        8    標準品（900μg/L）  0.5ml×1 瓶

  3   酶標包被板               12 孔×8 條       9    標準品稀釋液              1.5ml×1 瓶

  4   樣品稀釋液               6ml×1 瓶        10   說明書                 1 份

  5   顯色劑A 液              6ml×1 瓶        11   封板膜                 2 張

  6   顯色劑B 液              6ml×1/瓶        12   密封袋                 1 個

標本要求

    1．標本采集后盡早進行實驗。

    2．不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP ）活性,。

    3．可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。

操作步驟

1.  標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設(shè)標準品孔10 孔,，在*、第二孔中分別加標

    準品100μl,，然后在*,、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻,；然后從*孔,、第二

    孔中各取100μl 分別加到第三孔和第四孔，再在第三,、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,，

    混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl 棄掉,，再各取50μl 分別加到第五,、第六孔

    中，再在第五,、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,，混勻；混勻后從第五,、第六孔中各

    取50μl 分別加到第七,、第八孔中，再在第七,、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,，混

    勻后從第七、第八孔中分別取50μl 加到第九,、第十孔中,，再在第九第十孔分別加標準

    品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl 棄掉,。（稀釋后各孔加樣量都為50μl,，

    濃度分別為600μg/L,，400μg/L      ，200μg/L,，100μg/L,，50μg/L）。

2.  加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）,、待測樣

    品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl （樣

    品zui終稀釋度為5 倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混

    勻,。3.  溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。

4.  配液：將20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水20 倍稀釋后備用

5.  洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置30 秒后棄去,，如此

    重復(fù)5 次，拍干,。

6.  加酶：每孔加入酶標試劑50μl,，空白孔除外。

7.  溫育：操作同3,。

8.  洗滌：操作同5。

9.  顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

    15分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）,。

11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）,。測定應(yīng)在加終止

    液后15 分鐘以內(nèi)進行,。

計算

    以標準物的濃度為橫坐標，OD              值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線,，根據(jù)樣品的

OD 值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD 值計算出標

準曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD 值代入方程式,，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù),，

即為樣品的實際濃度,。

注意事項

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未

   用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。

2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結(jié)果,。

3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差,。一次加樣時間

   控制在5 分鐘內(nèi),，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣,。

4．請每次測定的同時做標準曲線，做復(fù)孔,。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD 值

   大于標準品孔*孔的OD 值）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定,，計

   算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染,。

6．嚴格按照說明書操作進行,，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

7．本試劑不同批號組分不得混用。底物請避光保存,。

8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9．如與英文說明書有異,，以英文說明書為準

檢測范圍：

  30μg/L -800μg/L

規(guī)格：

  96 人份/盒

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃,。

2．有效期：6 個月

廈門慧嘉生物科技有限公司專業(yè)提供各品牌ELISA試劑盒
詳情請登入: http://www.biohj.com
http://www.biohj.com/product.aspx?cid=1 

查詢，或    ：[email protected]