可溶性IL-2B含量的測定

    測定可溶性IL-2R（solubleIL-2R,，slL-2R）含量的方法簡便,，取材容易,，所需樣本量小,。因此不但可用于免疫學(xué)基礎(chǔ)理論研究,，還可作為臨床某些疾病輔助診斷,、病情監(jiān)測及藥效觀察的一項指標(biāo)。

    根據(jù)檢測原理不同,，slL-2R含量的測定方法主要有二類,，即雙抗體夾心法和競爭法，其中以雙抗體夾心法更為簡便,，敏感且常用,。

    1．雙抗體夾心法  需選用兩株針對slL-2R不同位點的McAb，其原理,、操作步驟及注意事項請參閱第五章,。若需提高敏感度，尚可使用熒光ELISA夾心法,，即采用生物素標(biāo)記McAb2,，進(jìn)行生物素-親合素-酶放大步驟，并采用熒光物質(zhì)為底物,，其敏感度可達(dá)10U／mL以下,，但操作步驟多，實驗要求高,。

    2．ELISA競爭法  本法是用純化的或重組IL-2R（P55）蛋白包被微孔板,，同時加入已知量的抗IL-2RMcAb和待檢slL-2R。待檢slL-2R與包被的純化IL-2R蛋白競爭與抗IL-2R抗體結(jié)合,。從抗IL-2R抗體與包被IL-2R蛋白結(jié)合受抑制的程度計算待測slL-2R的含量,，操作步驟如下：

    （1）以重組或純化IL-2R（1>55）40 000U／mL{g被聚苯乙烯板，每孔100t~L,，4℃過夜,。

    （2）1％BSA-PBS封閉，每孔200~zL,，置室溫2ho

    （3）洗滌后加入50ul不同稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)品及待測樣品,，稀釋液為1％BSA／PBS。同時加入50ul FITC標(biāo)記的抗IL-2RMcAb（0．2ug／mL）,，充分混勻置室溫2h（FITC為異硫氰酸熒光素,，這里僅作為半抗原）。

    （4）洗滌后各孔加入堿性磷酸酶標(biāo)記的兔抗FITC 100gL,，置室溫1h,。

    （5）洗滌后各孔加入1001~L底物溶液（對硝基苯磷酸鹽1mg／mL，用pH9．8的二乙醇胺緩沖液溶解）,。以波長405nm測OD值,。

    （6）以標(biāo)準(zhǔn)品的OD值繪制競爭抑制標(biāo)準(zhǔn)曲線，OD值隨slL-2R濃度的增加而降低,。

    （7）根據(jù)待檢樣品的OD值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出slL-2R含量,，不需計算抑制百分率,。

    （8）注意事項：

    ①本方法的敏感度為5 000U／mL，因此不適合檢查正常人標(biāo)本,，僅適用于檢測接受抗IL-2R抗體治療,，毛細(xì)胞性白血病等slL-2R水平極度增高的患者，以及作為檢測移植排斥反應(yīng)的指標(biāo),；

    ②若無純化或重組IL-2R蛋白,，可用PHA刺激的末梢血單個核細(xì)胞或MT-2細(xì)胞包被微孔板，吹干,，固定,，用1％H202處理抑制內(nèi)源性過氧化物酶后即可用。

廈門慧嘉生物科技有限公司專業(yè)提供各品牌ELISA試劑盒
詳情請登入: http://www.biohj.com
http://www.biohj.com/product.aspx?cid=1 

查詢,，或    ：[email protected]