抗卵巢抗體透明帶（Zona pellucida，ZP） 抗體檢測

    透明帶（Zona pellucida,，ZP）是圍繞在卵細胞周圍的一圈嗜酸性,、明膠樣結(jié)構(gòu)。ZP有很強的免疫原性,，能誘發(fā)機體產(chǎn)生全身與局部的細胞與體液免疫,，產(chǎn)生抗透明帶抗體（anti-zonapellucidaantibody，AZP）,。AZP與女性不孕癥有關(guān),。檢測AZP的方法有免疫沉淀反應(yīng),，間接免疫熒光法,，間接血凝，膠乳凝集試驗,，RIA及ELISA法等,。無論何種檢測方法，均需透明帶抗原,。由于豬和人卵透明帶有共同抗原,，故可用豬卵透明帶抗原作試驗。以下介紹間接ELISA法檢測AZP,。

    1．試劑  ZP精制抗原：用注射器從新鮮豬卵巢中吸取卵泡液,，在解剖鏡下從卵泡液中收集卵子，用PBS洗數(shù)次,，放在含0．1％枸櫞酸鈉的0．05mol／LPBS（pH7．0）中,，強力振蕩lmin，然后用PBS洗幾次,。再將卵子加熱溶解后可獲得熱溶解抗原,，即豬ZP的粗制抗原,。經(jīng)SephadexG-100凝膠過濾組分后便可獲精制抗原?？蛇x用高70cra,，直徑1．2cra的層析柱。凝膠柱用0．01mol／L,，pH7．4PBS流洗平衡后,，加樣，再用PBS洗脫,，分管收集,。將*蛋白峰用30％聚乙二醇或變色硅膠濃縮，經(jīng)PBS透析24h后即為ZP精制抗原,。

    2．操作步驟  每孔用0．1mLZP精制抗原（濃度用方陣法滴定）包被,，置4~C過夜，用洗滌液洗3次,，每次3min：每孔加含10％小牛血清的PBS 0．1mL,，37~C封閉30rain，用洗滌液洗3次,。加待測血清0．1mL,，37℃!h后洗3次。加zui適濃度HRP-羊抗人IgC 0．1mL,，37~C反應(yīng)1h,，洗滌。加新鮮配制的底物溶液,，每孔0．1mL,，室溫作用20min后，各孔加2mol／LH2S040．1mL終止反應(yīng),。

    3．注意事項  如果用豬ZP做為抗原檢測人血清AZP,，待測血清須用豬紅細胞吸收。如用人卵ZP作為抗原,，待測血清須用AB型人紅細胞吸收,。

    4．結(jié)果判定與臨床意義  與陽性、陰性對照血清參比,，目測顯黃棕色者為AZP陽性,， 無色或極淡黃色為陰性。也可測492nm的吸光度（A）值,。若待測標本A值大于或等于陰性對照血清A值的X+2．5S為陽性,。

   據(jù)報道不育婦女中抗透明帶抗體的發(fā)生率明顯高于對照組，因此認為此種自身抗體可能與部分婦女不育有關(guān),。

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