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微量加樣器(移液器)的具體操作方法
(一)設(shè)定容量值
Pipetman P加樣器容量計(jì)讀數(shù)由三位數(shù)字組成(顯示所轉(zhuǎn)移液體容量),,讀數(shù)到個(gè)
位數(shù),。Eppendorf Research加樣器容量計(jì)讀數(shù)則由四位數(shù)字組成,讀數(shù)到小數(shù)后一位,,從上(zui大有效數(shù)字)到下(zui小有效數(shù)字)讀取。利用底部刻度可將容量調(diào)節(jié)到更的分度。Pipetman P根據(jù)型號(hào)不同,,數(shù)字可能是黑色或紅色的。Eppendorf Research加樣器的數(shù)字不同型號(hào)均為白色,。
轉(zhuǎn)動(dòng)加樣器的黑色調(diào)節(jié)環(huán)或按鈕的白色調(diào)節(jié)旋鈕均可設(shè)定容量,。用白色調(diào)節(jié)旋鈕設(shè)定容量比較方便和快速,尤其是穿戴手套時(shí),。使用黑色調(diào)節(jié)環(huán)可較準(zhǔn)確調(diào)節(jié)到設(shè)定值,。
(二)吸液
首先選擇一支合適的吸頭安放在加樣器套筒上。使用P5000及P10ML時(shí),,裝吸頭前必在套筒上加插一過濾芯,。稍加扭轉(zhuǎn)壓緊吸頭使之與套筒間無(wú)空氣間隙,。未裝吸頭的加樣器絕不可用來(lái)吸取任何液體。
標(biāo)準(zhǔn)吸液步驟如下:
1.把按鈕壓至*停點(diǎn),。
2.垂直握持加樣器,,使吸頭浸入液樣中,浸入液體深度視型號(hào)而定,。
3.緩慢,、平穩(wěn)地松開按鈕,吸液樣,。等1s,,然后將吸頭提離液面。用藥用吸紙抹去吸嘴外面可能附著的液滴,。小心勿觸及吸頭口,。
(三)放液
1.將吸頭口貼到容器內(nèi)壁并保持100~400傾斜 2.平穩(wěn)地把按鈕壓到*停點(diǎn)。等1s后再把按鈕壓至第二停點(diǎn)以排出剩余液體,。
3.壓住按鈕,,同時(shí)提起加樣器,使吸頭貼容器壁擦過,。
4.松開按鈕,。
5.按吸頭彈射器除去吸頭(只有改用不同液體時(shí)才需更換吸頭)。
(四)預(yù)洗
當(dāng)裝上一個(gè)新吸頭(或改變吸取的容量值)時(shí)應(yīng)預(yù)洗吸頭,,先吸人1次液樣并將之排回原容器中,。
預(yù)洗新吸頭能有效提高移液的度和重現(xiàn)性。這是因?yàn)?次吸取的液體會(huì)在吸頭內(nèi)壁形成液膜,,導(dǎo)致計(jì)量誤差,。而同一吸頭在連續(xù)操作時(shí)液膜相對(duì)保持不變,故第2次吸液時(shí)誤差即可消除,。
(五)致密及黏稠液體
對(duì)于密度低于水的液體,,可將容量計(jì)的讀數(shù)調(diào)到低于所需值來(lái)進(jìn)行補(bǔ)償。
例如:用P20移液器轉(zhuǎn)移10/11血清,。先將讀數(shù)調(diào)到10//1,,吸取后以重量法測(cè)定。如實(shí)測(cè)體積為9.5/1l,,即偏差0.5/11,,則將讀數(shù)調(diào)到10.5Pl并重復(fù)1次。如第2次測(cè)定仍不夠準(zhǔn)確,,根據(jù)偏差再作調(diào)整,。
排放致密或黏稠液體時(shí),宜在*停點(diǎn)多等1~2s再壓到第二停點(diǎn),。
對(duì)密度高,、黏稠大或揮發(fā)性的液體,,推薦使用活塞正移動(dòng)加樣器。
(六)加樣器吸頭
加樣器吸頭是整個(gè)移液系統(tǒng)的有機(jī)組成部分,,對(duì)其基本要求是,,必須有高機(jī)械、熱力學(xué)和化學(xué)穩(wěn)定性,,且純度高,,生產(chǎn)過程純凈,無(wú)有機(jī)或化學(xué)物質(zhì)(如染料)和重金屬污染,。選擇密封良好的環(huán)口,、薄壁和嘴口尖細(xì)的吸頭,將使得在加樣時(shí),,吸頭的安裝或卸脫更加容易,。吸頭管壁有彈性,加樣吸液時(shí)不會(huì)產(chǎn)生漩渦,,這樣加樣的精度就更高,。吸頭嘴口無(wú)毛刺,表面光潔平滑,,使得其沾濕性極小,,可避免液體滯留外壁引起的誤差。吸頭應(yīng)與加樣器上吸頭套筒密封完好,,可防止由于空氣泄漏而造成加樣精度或準(zhǔn)確度的誤差,。此外,吸頭還應(yīng)有液體容積刻度線,。D200吸頭在20/1l和100~1處有標(biāo)記;D1000吸頭在300~1處有標(biāo)記,,D10吸頭在2/A1處有標(biāo)記,。zui后,吸頭應(yīng)可在121℃下消毒20min,。
如果在使用加樣器加樣中,,想避免樣品與樣品、樣品與加樣器或樣品與操作人員之間的污染,,建議使用Diamond帶濾芯吸頭,。Diamond帶濾芯吸頭可以經(jīng)高溫消毒,其內(nèi)置濾芯不會(huì)損壞,。
(七)注意事項(xiàng)
實(shí)驗(yàn)室基本上以使用連續(xù)可調(diào)的加樣器為主,。連續(xù)可調(diào)式加樣器在使用時(shí)應(yīng)注意以下幾點(diǎn),從而使加樣器能發(fā)揮*性能,。
1.取液之前,,所取液體應(yīng)在室溫(15—25℃)平衡,。
2.操作時(shí)要慢和穩(wěn)。
3.連續(xù)可調(diào)式加樣器在取樣加樣過程中應(yīng)注意移液吸頭不能觸及其他物品,,以免被污染,;移液吸頭盒(架子)、廢液瓶,、所取試劑及加樣的樣品管應(yīng)擺放合理,,以方便操作過程、避免污染為原則,。
4.連續(xù)可調(diào)式加樣器在使用完畢后應(yīng)置于加樣器架上,,遠(yuǎn)離潮濕及腐蝕性物質(zhì)。
5.吸頭浸入液體深度要合適,,吸液過程盡量保持不變,。
6.改吸不同液體、樣品或試劑前要換新吸頭,。
7.發(fā)現(xiàn)吸頭內(nèi)有殘液時(shí)必須更換,。
8.新吸頭使用前應(yīng)先預(yù)測(cè)。
9.為防止液體進(jìn)入加樣器套筒內(nèi),,必須注意以下幾點(diǎn):
①壓放按鈕時(shí)保持平穩(wěn),;
②加樣器不得倒轉(zhuǎn);
③吸頭中有液體時(shí)不可將加樣器平放,;
④P5000及P10ML加樣器一定要加濾芯,。
10.勿用油脂等潤(rùn)滑活塞或密封圈。
11.不可把容量計(jì)數(shù)調(diào)超其適用范圍,。
12.液體溫度與室溫有異時(shí),,將吸頭預(yù)洗多次再用。
13.移液溫度不得超過70℃,。
14.使用了酸或有腐蝕蒸氣的溶液后,,拆下套筒,用蒸餾水清洗活塞及密封圈,。
15.連續(xù)可調(diào)式加樣器在使用完畢后應(yīng)置于加樣器架上,,遠(yuǎn)離潮濕及腐蝕性物質(zhì)。
(八)故障排除
工作中如發(fā)現(xiàn)加樣器漏氣或計(jì)量不準(zhǔn),,其可能原因及解決方法為:
1.套筒螺帽松動(dòng) 用手?jǐn)Q緊螺帽,。
2.套筒刮花或破裂 卸下彈射器,檢查套筒,。P2,,P10或P20加樣器套筒破損時(shí),活塞也可能變形,。安裝套筒時(shí)應(yīng)用手?jǐn)Q緊螺帽,。
3.活塞或密封受化學(xué)腐蝕 更換活塞和密封圈,。用蒸餾水洗滌套筒內(nèi)壁。
發(fā)現(xiàn)套筒內(nèi)有液體,,可依下法清潔:卸下彈射器,,擰下螺帽并用蒸餾水洗滌套筒、活塞,、密封圈及O形環(huán),,待*干燥后重新組裝。
發(fā)現(xiàn)P5000及P10ML濾芯變濕必須更換,。
需要時(shí),,可將套筒、螺帽和彈射器在121~C消毒20rain,。注意密封圈及O形環(huán)不能高溫消毒,。
4.發(fā)現(xiàn)吸液時(shí)有氣泡
①將液體排回原容器;
②檢查吸頭浸入液體是否合適,;
③更慢地吸人液體,,如仍有氣泡應(yīng)更換吸頭。
凡是更換了活塞或操作桿的加樣器需進(jìn)行全面調(diào)校,。
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