PCR檢測血中HBV DNA是判斷乙肝zui可靠的方法

    血中HBV DNA的存在是HBV感染zui為直接，zui為靈敏和zui為特異的指標(biāo),。HBV DNA檢測方法目前在國內(nèi)使用zui廣的是聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）。使用PCR檢測血中HBV DNA,，其臨床診療價(jià)值主要有：

    1．急性HBV感染的診斷,。當(dāng)機(jī)體感染HBV時(shí)，在外周血中HBVDNA的出現(xiàn)要早于其他血清學(xué)抗原抗體指標(biāo),，并且只有HBVDNA存在才會(huì)引起感染,，因此使用極為靈敏特異的PCR方法檢測HBVDNA可為急性HBV感染提供直接證據(jù)。

    2．可用于篩選獻(xiàn)血員,，監(jiān)測血制品的傳染性和血源性乙肝疫苗的安全性,。

    3．HBVDNAPCR檢測結(jié)果與血清免疫學(xué)檢測結(jié)果的綜合評價(jià)。乙肝“兩對半”或乙肝“六項(xiàng)”（“兩對半”加上抗HBc-IgM）的ELISA檢測,，是臨床實(shí)驗(yàn)室zui常用來檢測乙肝的方法,，如何看待其檢測結(jié)果與HBVDNA檢測結(jié)果之間的關(guān)系，是臨床醫(yī)師以及患者zui為關(guān)心的問題,，關(guān)系到臨床治療方案的確定,。

    （1）與HBsAg檢測結(jié)果的關(guān)系：在實(shí)踐中，常遇到的問題是HBsAg ELISA測定結(jié)果與HBVDNA檢測結(jié)果之間的不一致,，有兩種情況：一是HBsAg陰性而HBV DNA PCR測定陽性,；二是HBsAg陽性但HBVDNA陰性。前者可能是因?yàn)?/span>HBsAgELISA測定敏感性低,，對極低濃度的HBsAg測不出,，而PCR具有*的靈敏度，HBVDNA含量即使很低（甚至低至數(shù)個(gè)分子）,，亦可檢測出來,；或HBsAg確已消失,，但HBVDNA仍持續(xù)存在，病毒仍處于低水平復(fù)制狀態(tài),；再有,，就是“a”抗原決定簇是HBV中和抗體作用的靶位，其相應(yīng)的編碼基因發(fā)生變異,，則無法用常規(guī)的雙抗體（抗HBs）夾心ELISA方法檢出HBsAg,，變異病毒株則可以逃避機(jī)體的免疫監(jiān)視而持續(xù)存在，表現(xiàn)為HBsAg陰性,，而HBVDNA陽性,。此外，在HBV初期感染時(shí),，也可能是有HBV DNA而無HBsAg,。HBVDNA陰性才是HBV消除的明確指標(biāo)。HBsAg陽性而HBVDNA陰性其原因一為血中BVDNA雖然存在,，但是在特定的PCR檢測方法的下限以下,，如有的PCR試劑靈敏度差，檢測HBVDNA的下限僅至1 000或100個(gè)拷貝,。第二種可能為血中存在的HBsAg是由HBVDNA整合到人染色體與宿主基因共同表達(dá)所致,，所以測不到血清中病毒DNA。通常,，HBsAg陽性血清,，PCR檢測HBVDNA的陽性率約為96％。肝組織活檢樣本HBVDNAPCR檢測陽性率為100％,。

    （2）與抗HBs的關(guān)系：HBV感染后至恢復(fù)期抗HBs陽性,，血清HBVDNAPCR檢測一般為陰性，少部分亦可為陽性,，但肝組織HBVDNAPCR陽性率仍可高達(dá)77．3％．說明HBV仍存在于肝臟中,。

    （3）與HBeAg，抗HBe和抗HBc的關(guān)系：HBeAg陽性血清,，HBVDNAPCR檢測幾乎全為陽性,，并且大部分（超過60％）含量大于10⁷拷貝／m1；HBeAg陰性而抗HBe陽性者,，絕大部分HBVDNA含量小于10³拷貝／ml,，但仍有少部分（約10％）大于10⁷拷貝／ml；在HBsAg陽性和抗HBc陽性者中,，有將近一半其血清HBVDNA含量大于10³拷貝／ml,，約1／3大于10⁷拷貝／m1。慢性乙肝患者外周單個(gè)核細(xì)胞中HBVDNAPCR檢測陽性率較高,，是乙肝復(fù)發(fā)的一個(gè)主要原因,。上述表明,，血清HBeAg陰性和抗HBe陽性，說明病毒復(fù)制減弱,，血中HBVDNA減少,，但并未*消失，并且少部分患者的HBVDNA含量還可能較高,，因此,，僅依靠抗原抗體檢測,，難以判斷病毒復(fù)制的程度及傳染性強(qiáng)弱,，PCR檢測HBVDNA應(yīng)是評價(jià)傳染性的zui可靠的方法。

    4．治療效果和抗病毒藥物的療效評價(jià),。HBV DNA檢測是乙肝病毒抗病毒治療惟一有效的監(jiān)測指標(biāo),，目前國內(nèi)用于HBVDNA定量測定的方法基本上為聚合酶鏈反應(yīng)（PCR），并以外標(biāo)準(zhǔn)作為定量依據(jù),。在臨床檢驗(yàn)中,，任何一種臨床檢驗(yàn)方法對同一份病人標(biāo)本在不同的測定批次，檢測某種指標(biāo)均有一定的結(jié)果差異,，不可能*一樣,，就像打靶一樣，同一個(gè)人用同一支槍,，槍再準(zhǔn),，人素質(zhì)再高，也是這次打10環(huán),，下次就是9．5環(huán),，再次又是10．2環(huán)，再或又是10環(huán)或只有9環(huán),。每次差異的多少跟槍和人有很大關(guān)系,，像奧運(yùn)會(huì)*，每槍間的環(huán)數(shù)差異就小,，像普通人,，則差異就很大。臨床檢驗(yàn)也是如此,。PCR用于HBVDNA定量檢測,，如是使用外部標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行定量，再加上HBVDNA定量數(shù)值大,，通常不同測定次間差異會(huì)較通常的檢驗(yàn)項(xiàng)目大,，一般量值變化在一個(gè)數(shù)量級內(nèi)均可視為沒有變化，因此,，當(dāng)一個(gè)HBV DNA PCR定量檢驗(yàn)結(jié)果為7．2E+08拷貝／ml的乙肝患者,，在抗病毒藥物如拉米夫啶或干擾素治療,，2周后，再檢測,，如結(jié)果為5．2E+08拷貝／ml,，再2周后，結(jié)果為9．0E+08拷貝／ml,，結(jié)果在一個(gè)數(shù)量級范圍內(nèi)變化,，說明結(jié)果沒有變化，抗病毒治療無效果,。7．2E+08為7．2X10⁸的意思,。

    乙肝病毒的抗病毒治療效果的判斷可以采用PCR方法動(dòng)態(tài)檢測患者血循環(huán)中HBV DNA，當(dāng)患者經(jīng)抗病毒藥物治療后,，HBVDNA含量持續(xù)下降,，然后維持在低水平，或低至方法能檢出的含量（測定下限）以下,，則說明治療有效,。觀察抗病毒藥物治療效果不能憑二三次檢測結(jié)果來判斷，必須多次動(dòng)態(tài)觀察,，每次檢測的間隔日數(shù)不宜太短,，一般為2周左右。因?yàn)榈侥壳盀橹?，人類對于病毒直到現(xiàn)在仍沒有找到有效的殺滅方法,，只能是用抑制病毒的藥物如拉米夫定等治療。而HBV一旦感染機(jī)體,，即體內(nèi)將終生攜帶該病毒,，不可能出現(xiàn)所謂的“轉(zhuǎn)陰”，使用PCR沒有檢出來,，只是說明血液中病毒的含量低于所用方法能檢出的量而已,。

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