酶聯(lián)免疫測定技術（ELISA）的放大系統(tǒng)

    酶免疫測定自20世紀70年代初創(chuàng)立以來,，由于其具有特異、靈敏,、簡便,、快速的特點，現(xiàn)已在生物醫(yī)學研究領域及臨床疾病的診療中得到了廣泛的應用，相對于放射免疫測定（RIA）技術來說,，EIA還有試劑半衰期長,，對環(huán)境污染小，試驗廢物易于處理等優(yōu)點,，但測定敏感性一般較RIA低,，于是，為提高EIA的測定敏感性,，出現(xiàn)了眾多的EIA測定放大系統(tǒng),，使EIA的測定敏感性趕上甚或超過了RIA。

建立正IA測定放大系統(tǒng)的一般原則

    EIA本身是以酶[辣根過氧化物酶（HRP）,、堿性磷酸酶（AP）等]作標記物的,，因此，EIA的測定放大始終是圍繞著標記酶來作文章的,，不外乎三種可能的方式：①增加標記酶的量,；②非顯色底物的應用,；③附加一個受標記酶催化的反應系統(tǒng),。

    一、增加標記酶的量

    通過生物素／親合素—酶或酶／抗酶復合物的間接方法,，可以增加ELISA測定中zui后所測定的標記酶的量,。這種方法雖在一定程度上由于標記酶的聚集增加了EIA的測定敏感性，但同時有增加非特異的背景顯色的可能,。

    二,、非顯色底物的應用

    從酶的反應底物著手，使用具有高測定敏感性的非顯色底物如熒光素或發(fā)光物,，從而提高EIA的測定敏感性,，這種方法的優(yōu)點是不需額外的步驟及試劑制備，缺點是需要特殊的測定儀器,。

    三,、附加一個受標記酶催化的反應系統(tǒng)

原始標記酶催化附加一個反應系統(tǒng)，如酶底物反應循環(huán)或酶級聯(lián)反應,，從而達到反應放大的目的,。這種由數(shù)個催化反應的耦聯(lián)而構建的放大系統(tǒng)，是酶放大的根本之所在,，敏感性的提高來源于真正的信號放大,，而不是簡單地將一個分子轉(zhuǎn)變?yōu)楦嗟囊子跍y定的分子。一個適用的酶放大系統(tǒng)的選擇除了要考慮生化因素外,，zui為重要的是酶及其底物的穩(wěn)定性,，并要易于獲得，因其對試驗的準確性和重復性有較大的影響,。

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