人腫瘤壞死因子α （TNF-α）ELISA試劑盒使用說明書

                              試劑盒僅供研究使用,。

藥品名稱：

通用名：人腫瘤壞死因子α （TNF-α）酶聯(lián)免疫分析試劑盒

使用目的：

  本試劑盒用于測定人血清,、血漿,、或其它組織液中腫瘤壞死因子α （TNF-α）含量,。

實驗原理

    本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人腫瘤壞死因子α （TNF-α）水平,。用純化的人

腫瘤壞死因子α （TNF-α）抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入

腫瘤壞死因子α，再與HRP 標記的羊抗人抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,，經(jīng)過

*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化

成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的人腫瘤壞死因子α呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波

長下測定吸光度（OD 值）,，通過標準曲線計算樣品中人腫瘤壞死因子α （TNF-α）濃度,。

試劑盒組成

  1   20 倍濃縮洗滌液           50ml×1 瓶       7    終止液                 6ml×1 瓶

  2   酶標試劑                6ml×1 瓶        8    標準品（450ng/L）  0.5ml×1 瓶

  3   酶標包被板               12 孔×8 條       9    標準品稀釋液              2ml ×1 瓶

  4   樣品稀釋液               6ml×1 瓶        10   說明書                 1 份

  5   顯色劑A 液              6ml×1 瓶        11   封板膜                 2 張

  6   顯色劑B 液              6ml×1/瓶        12   密封袋                 1 個

標本要求

    1．標本采集后盡早進行實驗。

    2．不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP ）活性,。

    3．可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融,。

操作步驟

1.  標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10 孔,，在*、第二孔中分別加標

    準品100μl,，然后在*,、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻,；然后從*孔,、第二

    孔中各取100μl 分別加到第三孔和第四孔，再在第三,、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,，

    混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl 棄掉,，再各取50μl 分別加到第五,、第六孔

    中,，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,，混勻,；混勻后從第五、第六孔中各

    取50μl 分別加到第七,、第八孔中,，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,，混

    勻后從第七,、第八孔中分別取50μl 加到第九、第十孔中,，再在第九第十孔分別加標準

    品稀釋液50μl,，混勻后從第九第十孔中各取50μl 棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl,，

    濃度分別為（300 ng/L,，200ng/L      ，100ng/L,，50 ng/L,，25 ng/L）。

2.  加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）,、待測樣

    品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl （樣

    品zui終稀釋度為5 倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混

    勻,。
3.  溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。

4.  配液：將20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水20 倍稀釋后備用

5.  洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置30 秒后棄去,，如此

    重復5 次,，拍干,。

6.  加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外,。

7.  溫育：操作同3,。

8.  洗滌：操作同5,。

9.  顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色

    15分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）,。

11. 測定：以空白空調(diào)零,，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應在加終止

    液后15 分鐘以內(nèi)進行,。

計算

    以標準物的濃度為橫坐標,，OD              值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線,，根據(jù)樣品的

OD 值由標準曲線查出相應的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD 值計算出標

準曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD 值代入方程式,，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù),，

即為樣品的實際濃度,。

注意事項

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未

   用完,，板條應裝入密封袋中保存,。

2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結(jié)果,。

3．各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性,，以避免試驗誤差,。一次加樣時間

   控制在5 分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣,。

4．請每次測定的同時做標準曲線，做復孔,。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD 值

   大于標準品孔*孔的OD 值）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定，計

   算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。

5．嚴格按說明書的操作進行,，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準

6．底物請避光保存。

7．封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染,。

8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9．本試劑不同批號組分不得混用,。

10.  如與英文說明書有異,，以英文說明書為準。

檢測范圍：

  20ng/L -400 ng/L

規(guī)格：

  96 人份/盒

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：,；2-8℃,。

2．有效期：6 個月

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