小鼠水通道蛋白1（AQP1）ELISA試劑盒說明書

本試劑僅供研究使用目的：本試劑盒用于測定小鼠血清,，血漿及相

關(guān)液體樣本中水通道蛋白1（AQP1）的含量,。

實驗原理：

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中小鼠水通道蛋白 1（AQP1）水平。用純化的小鼠水通道蛋白 1（AQP1）抗體包被微孔板,，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入水通道蛋白 1（AQP1），再與 HRP標(biāo)記的 AQP1抗體結(jié)合,，形成抗體 -抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB顯色,。TMB在 HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的水通道蛋白 1（AQP1）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm波長下測定吸光度（ OD值）,，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中小鼠水通道蛋白 1（AQP1）濃度,。

試劑盒組成：

樣本處理及要求：

1. 血清：室溫血液自然凝固 10-20分鐘，離心 20分鐘左右（ 2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清,，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心,。

2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇 EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,，混合 10-20分鐘后，離心 20分鐘左右（ 2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清,，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心,。

3. 尿液：用無菌管收集,，離心 20分鐘左右（ 2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清,，保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心。胸腹水,、腦脊液參照實行,。

4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集,。離心 20分鐘左右（ 2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時,，用 PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液,，細(xì)胞濃度達(dá)到 100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,。離心 20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心。

5. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后,，稱取重量,。加入一定量的 PBS，PH7.4,。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持 2-8℃的溫度,。加入一定量的 PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分,。離心 20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,，其余冷凍備用,。

6.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗,。若不能馬上進(jìn)行試驗，可將標(biāo)本放于 -20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融 .

7. 不能檢測含 NaN3的樣品,，因 NaN3抑制辣根過氧化物酶的（ HRP）活性。

操作步驟：

1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔 10孔,，在*,、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品 100μl，然后在*,、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl,，混勻；然后從*孔,、第二孔中各取 100μl分別加到第三孔和第四孔,，再在第三,、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl,，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl棄掉,，再各取 50μl分別加到第五,、第六孔中，再在第五,、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50ul,，混勻；混勻后從第五,、第六孔中各取 50μl分別加到第七,、第八孔中，再在第七,、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl,，混勻后從第七、第八孔中分別取 50μl加到第九,、第十孔中,，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl,，混勻后從第九第十孔中各取 50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為 50μl,，濃度分別為 3μg/L,，2μg/L，1μg/L,，0.5μg/L,，0.25μg/L。

2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同）,、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,，然后再加待測樣品 10μl（樣品zui終稀釋度為 5倍）,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻,。

3.溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 3 0分鐘。

4.配液：將 30（48T的 20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30（48T的 20倍）倍稀釋后備用,。

5.洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置 30秒后棄去，如此重復(fù) 5次,，拍干,。

6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl，空白孔除外,。

7.溫育：操作同 3,。

8.洗滌：操作同 5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl,，再加入顯色劑 B50μl,，輕輕震蕩混勻， 37℃避光顯色15分鐘.

10.終止：每孔加終止液 50μl,，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）,。

11.測定：以空白空調(diào)零， 450nm波長依序測量各孔的吸光度（ OD值）,。測定應(yīng)在加終止液后 15分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。

注意事項：

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。

2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果,。

3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差,。一次加樣時間

控制在 5分鐘內(nèi),，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣,。

4．請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本 OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的 OD值）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（ n倍）后再測定,，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染,。

6．底物請避光保存。

7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn) .

8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9．本試劑不同批號組分不得混用,。 10. 如與英文說明書有異,，以英文說明書為準(zhǔn)。

計算：以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),， OD值為縱坐標(biāo),，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的 OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,，將樣品的 OD值代入方程式,，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù),，即為樣品的實際濃度,。

（此圖僅供參考）

試劑盒性能：

1.     樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù) R值為 0.990以上。

2.     批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于 9%和 11%

檢測范圍：

0.1μg/L -4μg/L

保存條件及有效期：

1           2-8℃,。

2           6個月

廈門慧嘉生物科技有限公司專業(yè)代理眾多生命科學(xué)領(lǐng)域的,。致力于各種ELISA試劑盒、一抗二抗、細(xì)胞因子,、生物試劑,、移液器、耗材的銷售推廣及服務(wù)工作,。
咨詢：      歡迎 或索取原版說明書

下載更多說明書http://www.biohj.com/download.aspx