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大鼠膽囊收縮素(CCK)ELISA試劑盒說明書

時間:2011/5/19閱讀:363
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大鼠膽囊收縮素(CCK)ELISA試劑盒說明書
本試劑盒僅供研究使用                                       
預期應用
ELISA法定量測定大鼠血清、血漿或其它相關(guān)液體中膽囊收縮素,,CCK含量,。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心酶標免疫分析法測定標本中CCK水平,。用純化的抗體包被微孔板,制成固相抗體,,往包被抗體的微孔中依次加入CCK,、生物素化的抗大鼠CCK抗體、HRP標記的親和素,,經(jīng)過*洗滌后用底物TMB顯色,。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的CCK呈正相關(guān),。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度,。
試劑盒組成
1.         酶聯(lián)板:一塊(96孔)
標準品(凍干品):2瓶,,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,蓋好后靜置10分鐘以上,,然后反復顛倒/搓動以助溶解,,其濃度為100 pmol/L,做系列倍比稀釋后,,分別稀釋成100 pmol/L,,50 pmol/L ,25 pmol/L,,12.5 pmol/L,,6.25 pmol/L,3.12 pmol/L,,1.56 pmol/L,,其原液直接作為zui高標準濃度,樣品稀釋液直接作為標準濃度0 pmol/L,,臨用前15分鐘內(nèi)配制,。
如配制50 pmol/L標準品:取0.5ml 100 pmol/L的上述標準品加入含有0.5ml樣品稀釋液的離心管中,混勻即可,,其余濃度以此類推,。
2.         樣品稀釋液:1×20ml/瓶。
3.         檢測稀釋液A:1×10ml/瓶,。
4.         檢測稀釋液B:1×10ml/瓶,。
5.         檢測溶液A:1×120ul/瓶(1:100)臨用前以檢測稀釋液A1:100稀釋。
6.         檢測溶液B:1×120ul/瓶(1:100)臨用前以檢測稀釋液B1:100稀釋,。
7.         底物溶液:1×10ml/瓶,。
8.         洗滌液:1×30ml/瓶,使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍,。
9.         終止液:1×10ml/瓶(2N H2SO4),。
 
標本的采集及保存
1.血清:標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,,或?qū)吮痉庞?20℃保存,,但應避免反復凍融。
2.血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,,標本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,,或?qū)吮痉庞?20℃保存,但應避免反復凍融,。
注:標本溶血會影響zui后檢測結(jié)果,,因此溶血標本不宜進行此項檢測。
 
操作步驟
實驗開始前,,請?zhí)崆芭渲煤盟性噭?,試劑或樣品稀釋時,,均需混勻,混勻時盡量避免起泡,。每次檢測都應該做標準曲線,。如樣品濃度過高時,用樣品稀釋液進行稀釋,,以使樣品符合試劑盒的檢測范圍,。
1.         加樣:分別設空白孔、標準孔,、待測樣品孔,。空白孔加樣品稀釋液100ul,,余孔分別加標準品或待測樣品100ul,,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,,盡量不觸及孔壁,,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,,37℃反應120分鐘,。
為保證實驗結(jié)果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液,。
2.         棄去液體,,甩干,不用洗滌,。每孔加檢測溶液A工作液 100ul(取1ul檢測溶液A加99ul檢測稀釋液A的比例配制,,輕輕混勻,在使用前一小時內(nèi)配制),,37℃,60分鐘,。
3.         溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,,甩干,,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,,350ul/每孔,,甩干。
4.         每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100ul,,37℃,,60分鐘。
5.         溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,,甩干,,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,,350ul/每孔,,甩干,。
6.         依序每孔加底物溶液90ul,,37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,,后3-4孔梯度不明顯,,即可終止)。
7.         依序每孔加終止溶液50ul,,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色),。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準確性,,底物反應時間到后應盡快加入終止液,。
8.         用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行檢測,。
1. 每次實驗留一孔作為空白調(diào)零孔,,該孔不加任何試劑,只是zui后加底物溶液及2NH2SO4,。測量時先用此孔調(diào)OD值至零,。
2.為防止樣品蒸發(fā),試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi),,酶標板加上蓋或覆膜,。
3. 未使用完的酶標板或者試劑,請于2-8保存,。標準品,、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用,。請勿重復使用已稀釋過的標準品,、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
4. 建議檢測樣品時均設雙孔測定,,以保證檢測結(jié)果的準確性,。
洗板方法
手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內(nèi)的液體;在實驗臺上鋪墊幾層
水紙,,酶標板朝下用力拍幾次,;將推薦的洗滌緩沖液至少0.4ml注入孔內(nèi),浸泡1-2分鐘,根據(jù)需要,,重復此過程數(shù)次,。
    自動洗板:如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中,。
特異性
    本試劑盒可同時檢測重組或天然的大鼠CCK,,且與其它相關(guān)蛋白無交叉反應。
計算
  以標準物的濃度為橫坐標(對數(shù)坐標),,OD值為縱坐標(普通坐標),,在半對數(shù)坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度,;再乘以稀釋倍數(shù),;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,,計算出樣品濃度,,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度,。
注意事項
1. 洗滌過程非常重要,,不充分的洗滌易造成假陽性。
2. 一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),,如標本數(shù)量多,,推薦使用排槍加樣。
3. 請每次測定的同時做標準曲線,,做復孔,。
4. 如標本中待測物質(zhì)含量過高,請先稀釋后再測定,,計算時請zui后乘以稀釋倍數(shù),。
5.在配制標準品、檢測溶液工作液時,,請以相應的稀釋液配制,,不能混淆。
6.底物請避光保存,。
檢測范圍:
1.56 pmol/L -100 pmol/L
說明
1.試劑盒保存:-20℃(較長時間不用時),;2-8℃(頻繁使用時)。
2.有效期:6個月
3.濃洗滌液會有鹽析出,,稀釋時可在水浴中加溫助溶,。
4.剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質(zhì),此為正?,F(xiàn)象,,不會對實驗結(jié)果造成任何影響。
5.中、英文說明書可能會有不一致之處,,請以英文說明書為準,。
 
廈門慧嘉生物科技有限公司專業(yè)代理眾多生命科學領域的。致力于各種ELISA試劑盒,、免疫組化試劑盒,、一抗二抗、細胞因子,、生物試劑,、移液器、耗材的銷售推廣及服務工作,。
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下載更多說明書http://www.biohj.com/download.aspx
 

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