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人抗精子抗體(AsAb)ELISA試劑盒說明書

時(shí)間:2011/4/29閱讀:272
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人抗精子抗體(AsAb)ELISA試劑盒說明書
本試劑盒僅供研究使用,。
藥品名稱:
通用名:人抗精子抗體(AsAb)酶聯(lián)免疫分析試劑盒
使用目的:
本試劑盒定性測(cè)定人血液,、或其它相關(guān)組織中抗精子抗體(AsAb)
實(shí)驗(yàn)原理:
本試劑盒采用雙抗原夾心酶聯(lián)免疫法(ELISA)測(cè)定標(biāo)本中人抗精子抗體(AsAb),。用純化的精子抗原包被微孔板,,制成固相抗原,,可與樣品中人抗精子抗體(AsAb)相結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后再與HRP標(biāo)記的精子抗原結(jié)合,,形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物,,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測(cè)定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,,從而判定標(biāo)本中人抗精子抗體(AsAb)的存在與否,。
試劑盒組成:

1
20倍濃縮洗滌液
50ml×1瓶
7
終止液
6ml×1瓶
2
酶標(biāo)試劑
6ml×1/瓶
8
標(biāo)準(zhǔn)品(陽性對(duì)照)
0.5ml×1瓶
3
酶標(biāo)包被板
12孔×8條
9
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(陰性對(duì)照)
0.5ml×1瓶
4
樣品稀釋液
6ml×1瓶
10
說明書
1份
5
顯色劑A液
6ml×1瓶
11
封板膜
2張 
6
顯色劑B液
6ml×1瓶
12
密封袋
1個(gè)

標(biāo)本要求:
1.標(biāo)本處理:血清,、血漿標(biāo)本可直接檢測(cè)
2.標(biāo)本按要求制備后盡早進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。如不能及時(shí)檢測(cè),,可將標(biāo)本在-20℃保存一個(gè)月,,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性,。
操作步驟:
1.         編號(hào):將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照2孔,、陽性對(duì)照2孔,、空白對(duì)照1孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)
2.         加樣:分別在陰,、陽性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照,、陽性對(duì)照(標(biāo)準(zhǔn)品)50μl。然后在待測(cè)樣品孔先加樣品稀釋液40μl,,然后再加待測(cè)樣品10μl,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,,輕輕晃動(dòng)混勻,,
3.         溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  
4.         配液:將20倍濃縮洗滌液加蒸餾水至1000ml后備用
5.         洗滌:小心揭掉封板膜,,棄去液體,,甩干,每孔加滿洗滌液,,靜置30秒后棄去,,如此重復(fù)5次,拍干,。
6.         加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,,空白孔除外。
7.         溫育:操作同3,。
8.         洗滌:操作同5,。
9.         顯色:每孔先加入顯色劑A 50μl,再加入顯色劑B 50μl,,輕輕震蕩混勻,,37℃避光顯色15分鐘
10.     終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色),。
11.     測(cè)定:以空白空調(diào)零,,450nm波長依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
 
結(jié)果判定:
  試驗(yàn)有效性:陽性對(duì)照孔平均值≥1.00; 陰性對(duì)照平均值≤0.10
 臨界值(CUT OFF)計(jì)算:臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15
 陰性判定:樣品OD值< 臨界值(CUT OFF)者為人抗精子抗體(AsAb)陰性
 陽性判定:樣品OD值≥ 臨界值(CUT OFF)者為人抗精子抗體(AsAb)陽性
注意事項(xiàng)
1.操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行,,本試劑不同批號(hào)組分不得混用,。
2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,,板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。
3.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,,洗滌時(shí)不影響結(jié)果,。
4. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染,。
5.底物請(qǐng)避光保存,。
6.試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),使用雙波長檢測(cè)時(shí),,參考波長為630nm
7.所有樣品,,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為2M的硫酸,,使用時(shí)必須注意安全,。
規(guī)格:
     96人份/盒
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8,。
2.有效期:6個(gè)月
 
廈門慧嘉生物科技有限公司專業(yè)代理眾多生命科學(xué)領(lǐng)域的,。致力于各種ELISA試劑盒、免疫組化試劑盒,、一抗二抗,、細(xì)胞因子、生物試劑,、移液器,、耗材的銷售推廣及服務(wù)工作。
:     http://www.biohj.com 
 

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