什么是毛細管電泳?毛細管電泳(capillary electrophoresis, CE)又叫毛細管電泳(HPCE), 是近年來發(fā)展zui快的分析方法之一,。毛細管電泳是一類以毛細管為分離通道,、以高壓直流電場為驅(qū)動力的新型液相分析技術(shù)。毛細管電泳是將電泳的場所置于毛細管中的一種電泳分離方法,,它的裝置結(jié)構(gòu)通常由高壓電源,、鉑電極,、緩沖液池,、樣品池、毛細管,、檢測器和分析記錄儀構(gòu)成
,。毛細管電泳的原理和過程是怎樣的?毛細管電泳分離的基本流程有進樣,、分離和檢測三步驟,。進樣:毛細管電泳的基本裝置是一根充滿電泳緩沖液的毛細管,與毛細管兩端相連的兩個小瓶微量樣品從毛細管的一端通過“壓力”或“電遷移”進入毛細管,;分離:電泳時,,與高壓電源連接的兩個電極分別浸人毛細管兩端小瓶的緩沖液中。樣品朝與自身所帶電荷極性相反的電極方向泳動,。各組分因其分子大小,、所帶電荷數(shù),、等電點等性質(zhì)的不同而遷移速率不同,依次移動至毛細管輸出端附近的光檢測器,,檢測,、記錄吸光度,并在屏幕上以遷移時間為橫坐標,,吸光度為縱坐標將各組分以吸收峰的形式動態(tài)直觀地記錄下來,;檢測:檢測的原理基于被測組分和背景電解質(zhì)的吸光度不同,當(dāng)被測組分通過檢測窗時,,吸光度發(fā)生的變化服從朗伯-比爾定律,,即在一定的實驗條件下,吸光度與被測組分的濃度成正比,。
毛細管電泳和普通電泳相比較的優(yōu)勢在哪里,?通常電流通過導(dǎo)體時都會產(chǎn)生焦耳熱。傳統(tǒng)平板凝膠電泳的zui大局限性在于,,其無法克服兩端高電壓帶來的焦耳熱所產(chǎn)生的負面影響,。焦耳熱可使篩分介質(zhì)內(nèi)部出現(xiàn)溫度、粘度及分離速度的不均一,,影響遷移,、降低效率、使區(qū)帶變寬,。由于這種負面影響與電場強度成正比,,所以極大地限制了高電壓的引入,也難以提高電泳速度,。毛細管電泳使樣品在一根極細的柱子中進行分離,。細柱可減小電流,使焦耳熱的產(chǎn)生減少,;同時又增大了散熱面積,,提高散熱效率,大大降低了管中心與管壁間的溫差,,減少了柱子徑向上的各種梯度差,,保證了分離。因此可以加大電場強度,,達到100~200V/cm,,全面提高分離質(zhì)量。
毛細管電泳主要用于哪些實驗,?總的來說,,毛細管電泳可用于對有機化合物、無機離子,、中性分子,、手性化合物,、蛋白質(zhì)和多肽、DNA和核酸片段的分析,。具體來說,,常見的應(yīng)用范圍有以下幾個方面:
(1)高速DNA測序:由于人類基因組工程的提出,高速DNA測序引起了廣泛注意,,由于對核苷酸及其聚合物*的分辨率,,毛細管電泳在DNA測序中的應(yīng)用潛力也受到重視。在高電場和使用陣列毛細管條件下,,其潛在的測序能力遠遠超過了現(xiàn)有方法,。
(2)手性分離現(xiàn)代社會中,手性分析常牽涉到人類生命,、動植物的生存和演化,,在藥物研究和生產(chǎn)中也是必須考慮的問題,研究證明手性手細管電泳是zui簡單的手性分析方法,。手性應(yīng)用的研究包括異構(gòu)體拆分,、能度測定、反應(yīng)動力學(xué)研究,、手性藥物篩查等,。
(3)蛋白質(zhì)分析蛋白質(zhì)分離分析也是毛細管電泳的主要應(yīng)用方向,包括:蛋白和多肽的純度分析,、結(jié)構(gòu)研究,、結(jié)合蛋白的研究、生化及其過程分析,、物化常數(shù)的測定,,臨床醫(yī)學(xué)研究等。
(4)糖分析糖是自然界中廣泛存在的化學(xué)物質(zhì),,已發(fā)現(xiàn)的蛋白質(zhì)中90%以上含有糖堿基,;糖在細胞識別以及其它生物分子識別中也具有不可替代的作用。但是由于糖的一些特殊性質(zhì),,對它的分離分析有很大的困難,。而近年發(fā)展起來的毛細管電泳儀用于糖的分析取得了巨大的成功,,成為糖分離分析的有效工具,。
(5)單細胞分析毛細管電泳既能研究許多細胞構(gòu)成的樣品,也能只研究單個細胞,,即單細胞分析,。單細胞分析技術(shù)為生命科學(xué)研究打開了新的天地,推動了一系列的新研究的出現(xiàn),,已被廣泛應(yīng)用于生物學(xué),、免疫學(xué),、血液流變學(xué)、細胞生理學(xué),,臨床醫(yī)學(xué),,特別是腫瘤研究和器官移植,。
(6)聯(lián)用技術(shù)聯(lián)用技術(shù)的研究將是毛細管電泳儀的重大發(fā)展方向之一,,與譜、質(zhì)譜等方法的聯(lián)用將會大大提高毛細管電泳儀的應(yīng)用范圍,。
上海金鵬分析儀器有限公司
: 61425398 36162366
:,,, 842727501,, 2460311703,, 2431022418,170324176
地址:上海市真陳路1398弄15號 :200444
立即詢價
您提交后,,專屬客服將第一時間為您服務(wù)