PCR新手指南:PCR儀的三種控溫模式
在進行PCR儀中控溫模式設定時,,一般有三個選項:Block,、Tube及Probe。下面就這三種模式種簡單的介紹:
PCR儀的溫度傳感器一般是在模塊下面的,,也就是說儀器實際能夠控制的是模塊的溫度,,Block模式指的就是儀器以控制Block的溫度為目的,也就是說你輸入95度5分鐘,,則模塊的溫度達到95度后開始計時,,5分鐘后完成。這是zui基本的控溫模式,。
但是,,實際上我們輸入95度5分鐘是希望PCR管內的溫度達到95后開始計時5分鐘。PCR儀器開發(fā)人員可以先將模塊溫度控制到97度(比如而已,,如果不超過95度,,管內溫度可以很長時間才能達到95度或根本達不到),過幾秒鐘后,,等到管內溫度達到95度,,再將模塊溫度降到95度。這樣做既達到了管內溫度到95度,,且速度較快,。但過沖的溫度量與時間及PCR管的導熱系數、PCR反應液的體積都有關系,。這就是各個PCR儀廠家的核心技術了,。這種控溫方式就稱為Tube模式。
如果直接將一個溫度傳感器加入PCR管中,,直接測量PCR管內的溫度不是也可以嗎,?這就是Probe模式,也就是在一個不進行PCR反應的管內放入一個溫度探頭,,儀器根據溫度探頭測到的溫度來控制PCR管內的溫度,。但傳感器的數據檢測、分析及反饋是需要時間的,,這種控制模式不一定比Tube模式好,,而且如果反應體積發(fā)生變化時,就比較麻煩了,。
因此,,如今的PCR儀就都是Block和Tube兩種模式了,。如果是正常的PCR反應,一般選Tube模式,。如果是長時間保溫且對溫度過沖要求很高,,則可以考慮用Block模式。
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