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實驗試劑

采用T7• Tag Affinity Purification Kit
T7•Tag抗體瓊脂。B/W緩沖液：4.29mM Na2HPO4,，1.47 mM KH2PO4,，2.7 mM KCl， 0.137mM NaCl,，1%吐溫-20,，pH7.3 洗脫緩沖液: 0.1M檸檬酸，pH2.2. 中和緩沖液：2M Tris,，pH10.4,。 PEG 20000。
實驗步驟

1.100ml 含重組表達質粒的菌體誘導后,，離心5000g×5min,，棄上清，收獲菌體,，用10ml預冷的B/W緩沖液重懸,。
2. 重懸液于冰上超聲處理，直至樣品不再粘稠,，4℃離心 14000g×30min,，取上清液，0.45μm膜抽濾后作為樣品液,。
3. 將結合T7•Tag抗體的瓊脂充分懸起,，平衡至室溫,，裝入層析柱中。
4. B/W緩沖液平衡后樣品液過柱,。
5. 10ml B/W緩沖液過柱,，洗去未結合蛋白。
6. 用5ml洗脫緩沖液過柱,，每次1ml,，洗脫液用含150μl中和緩沖液的離心管收集，混勻后置于冰上,，直接SDS-PAGE分析,。
7. 將洗脫下來的蛋白放入透析袋中，雙蒸水透析24hr,，中間換液數(shù)次,。
8. 用PEG 20000濃縮蛋白。
注意事項

蛋白在過層析柱前,，要0.45μm膜抽濾,，否則幾次純化后，柱子中會有不溶物,。