為此必須提供具有分離能力和高靈敏度檢測能力的全新分析方法,并用于微量和痕量組分的分離和檢測,。
納米(標度)液相色譜技術和超高壓液相色譜技術正是適應上述分析要求,,先后于20世紀80年代末期和90年代初期先后提出。他們突破了常規(guī)液相色譜儀理論的約束,,采用粒徑約為1.0μm的粒子填充色譜柱,。在實驗裝置上采用當代的技術,用微流路處理器提供納升數(shù)量級微小,、穩(wěn)定的流動相流量,,用微芯片制作技術在硅晶片上蝕刻出納米尺寸的色譜柱管,制造了填充壓力高達410MPa(60000psi)的高壓輸液泵和耐壓1030MPa(150000psi)的高壓進樣閥,,實現(xiàn)了前人從未實踐過的毛細管液相色譜分離技術,。創(chuàng)建了理論塔板數(shù)高至20~40萬塊/m的高柱效,完成了組成復雜生物樣品的分離,,還實現(xiàn)了與MS的聯(lián)用,。從這些新技術的進展,可充分看到色譜工作者的創(chuàng)造能力,。
用于微柱液相色譜儀分析的高壓輸液泵,,其輸出流量應當準確,并有良好的重復性,。由于輸出流量較小,,早期曾使用氣動放大泵和螺桿注射泵,后經(jīng)改造常規(guī)往復式柱塞泵,,使其也可輸出低流量流動相,。
現(xiàn)多采用小型螺桿注射泵和往復式柱塞泵。往復式柱塞泵由于螺桿注射泵,,它具有對大的柱反壓的補償能力,,快的流路平衡和穩(wěn)定性,并可用于梯度洗脫,。由于液流的混合有一定的困難,,在低流速下柱加壓是一個耗費時間的過程,若在梯度洗脫中使用螺桿注射泵,,會明顯的增加梯度延遲,。
當對微柱進行二元、三元,、四元梯度洗脫時,,使用低壓梯度仍是的方法,,此時應使用精密時間比例電磁閥。此閥能準確控制每種溶劑的比例,,確保不存在滲漏和粘結,,使每種低流量溶劑在小體積混合器中*混合。當使用高壓梯度洗脫時也必須使用小體積的混合器,,為保證高的混合效率,,混合器也可使用一個很小的填充柱。對內(nèi)徑1.0mm,、長200~300mm的微柱,,其柱體積約為100~150μL;對內(nèi)徑0.5mm、長250mm的微柱,,其柱體積已小至30μL,。我們由此可知,微柱液相色譜儀梯度洗脫中所用混合器的體積要遠小于柱體積,,并要具有很高的混合效率,,這在儀器制作商的難度很大。當然,,由于液相色譜儀廠家的技術和各方面服務是不盡相同的,,要想儀器、使用壽命達到zui長,,那么選擇一家比較專業(yè)的廠家是異常重要的,。
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