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液相色譜柱的正確使用方法

閱讀:2290      發(fā)布時間:2015-12-31
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日常分離分析工作中,液相色譜柱的使用和維護(hù)十分重要,,液相色譜柱使用是否得當(dāng),,直接影響柱子的壽命,稍有不慎就會降低柱效,、縮短使用壽命甚至損壞,。

液相色譜柱的正確使用:

(1)柱子在裝卸、更換時,,動作要輕,,接頭擰緊要適度。必須防止較強(qiáng)的機(jī)械振動,,以免柱床產(chǎn)生空隙,。

(2)如果儀器用來做常規(guī)分析,樣品種類有限,,但分析次數(shù)多,,則不妨為每一類常規(guī)分析配置一根柱,這樣有助于延長柱子的壽命,。

(3)避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動,。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內(nèi)的填充狀況;柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內(nèi)填料,因此在調(diào)節(jié)流速時應(yīng)該緩慢進(jìn)行,,在閥進(jìn)樣時閥的轉(zhuǎn)動不能過緩。

(4)應(yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成,,特別是反相色譜中,,不應(yīng)直接從有機(jī)溶劑改變?yōu)槿渴撬粗嗳弧?/p>

(5)如使用柱溫控制裝置時,,應(yīng)注意在通人流動相后才能升溫,。

(6)一般說來色譜柱不能反沖,只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時,才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì),。否則反沖會迅速降低柱效,。

(7)選擇使用適宜的流動相,以避免固定相被破壞,。有時可以在進(jìn)樣器前面連接一個預(yù)柱,,分析柱是鍵合硅膠時,預(yù)柱為硅膠,,可使流動相在進(jìn)入分析柱之前預(yù)先被硅膠“飽和”,,避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。

(8)避免將基質(zhì)復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注人柱內(nèi),,需要對樣品進(jìn)行預(yù)處理或者在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一個保護(hù)柱,。保護(hù)柱一般是填有相似固定相的短柱。保護(hù)柱可以而且應(yīng)該經(jīng)常更換,。

(9)經(jīng)常用強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱,,清除保留在柱內(nèi)的雜質(zhì)。在進(jìn)行清洗時,,對流路系統(tǒng)中流動相的置換應(yīng)以相混溶的溶劑逐漸過渡,,每種流動相的體積應(yīng)是柱體積的20倍左右,即常規(guī)分析需要50-75mL,。

(10)保存色譜柱時應(yīng)將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇,,柱接頭要擰緊,防止溶劑揮發(fā)干燥,。禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置更長時間,。

(11)色譜柱使用過程中,如果壓力升高,,一種可能是燒結(jié)濾片被堵塞,,這時應(yīng)更換濾片或?qū)⑵淙〕鲞M(jìn)行清洗;另一種可能是大分子進(jìn)人柱內(nèi),,使柱頭被污染;如果柱效降低或色譜峰變形,,則可能柱頭出現(xiàn)塌陷,死體積增大,。

(12)在完成分離分析工作之后,,不應(yīng)立即停機(jī),需及時對色譜分析系統(tǒng)進(jìn)行沖洗,,一般0.5h以上,,以除去色譜柱內(nèi)的雜質(zhì)。

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