摘要 : 鹽析的發(fā)生是由于鹽濃度增大到一定數值時使水活性降低,,導致蛋白質分子表面電荷逐漸被中和,水化膜逐漸被破壞,,引起蛋白質分子之間相互聚集并從溶液中析出,,zui后經離心機分離后獲得沉淀物和上清液。
一,、蛋白質鹽析分離的原理:
蛋白質在稀鹽溶液中溶解度會隨著鹽濃度的增大而上升(鹽溶),,當鹽濃度增大到一定數值時,其溶解度又逐漸下降直至蛋白質析出,。鹽析的發(fā)生是由于鹽濃度增大到一定數值時使水活性降低,,導致蛋白質分子表面電荷逐漸被中和,水化膜逐漸被破壞,,引起蛋白質分子之間相互聚集并從溶液中析出,,zui后經離心機分離后獲得沉淀物和上清液。
二,、影響蛋白質鹽析分離的因素:
1,、蛋白質濃度:
蛋白質濃度過大,鹽析時發(fā)生共沉現象,,分離效果不好,。蛋白質濃度太稀,耗鹽量過大,,蛋白質回收率低,。一般蛋白質濃度在2.5%~3.0%較適中。
2,、離子強度:
離子強度越大,,蛋白質的溶解度越低,越容易產生鹽析現象,。
3,、離子類型:
離子半徑小而價數高的離子,對鹽析影響較強,。離子半徑大而價數低的離子,,對鹽析影響較弱。
4,、PH值:
蛋白質所帶凈電荷越多,,溶解度越大,。凈電荷為零時,溶解度zui低,。一般將PH值調到蛋白質等電點附近,,這樣有利于鹽析。
5,、溫度:
低離子強度或水中,,在一定范圍內蛋白質的溶解度隨著溫度的升高而增大。高鹽溶液中,,蛋白質的溶解度隨著溫度的升高有時反而下降,。一般情況下在0~4℃操作。
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