電泳:在直流電場中,,帶電荷的粒子向帶符號相反的電極移動,,稱為電泳。電泳也是一種分離的方法和技術(shù),,就是分離和鑒定混合物中帶電粒子(包括離子,、高分子多電解質(zhì)、膠體粒子,、病毒顆粒以致活的細(xì)胞,,如細(xì)菌和紅細(xì)胞等)的技術(shù)。
電泳裝置:由電泳儀(電源)和電泳槽(混合樣品電泳時的支持物)組成,。
電泳儀(電源):為混合樣品電泳時提供直流電場,。電泳儀可提供恒定電壓、恒定電流和恒定功率,。
電壓分為:高壓>1500V,;中壓 500-1500V;低壓<500V
電流分為:大電流>500mA,;中電流 100-500 mA,;小電流<100 mA
功率為分:大功率>200W;中功率 60-200W,;小功率<60W
選擇何種規(guī)格的電泳儀(電源)視電泳類型及樣品分子量大小,。
通常高電壓電泳適用于分離小分子質(zhì)量物質(zhì),如氨基酸,、肽,、抗生素等。
恒定功率電源適用于做等電聚焦電泳,。
大電流適用于做轉(zhuǎn)移電泳,。
低電壓電泳適用于瓊脂糖凝膠電泳法分離大分子核酸。
使用zui多的是中壓電泳儀(如DYY-6),,適用于聚丙烯酰胺凝膠電泳,此法普遍用于分離蛋白質(zhì)及較小分子的核酸,。
電泳槽:常用的電泳槽有垂直電泳槽(主要用于分離蛋白質(zhì))和水平電泳槽(主要用于分離核酸樣品),。為蛋白質(zhì)和核酸的分離而設(shè)計(jì)的平板電泳儀,通常有水平和垂直平板二類,。蛋白質(zhì)的電聚焦和免疫電泳常采用水平板電泳形式,,而蛋白質(zhì)的其他形式區(qū)帶電泳電泳則常采用垂直板電泳形式,。特別是使用不連續(xù)體系沖液進(jìn)行電泳時,垂直板電泳要比水平板電泳簡便得多,。實(shí)驗(yàn)室普遍使用的一種垂直板電泳(附圖)所示,。2塊平板玻璃,根據(jù)電泳儀的大小裁定,。其中一塊上端開槽口,,一般槽口的大小比例是:如果平板玻璃是17cm*19cm標(biāo)準(zhǔn)平板,那么所開槽口的大小是深2.0cm,,長14cm,。平板玻璃厚度常用3mm。2塊平板玻璃之間,、左,、右、下3邊加上墊片(又稱隔條)就可組裝成一個平板凝膠模,。為了防止凝膠溶液滲漏和制成一塊厚薄均勻的平板凝膠,,必須使用強(qiáng)有力的夾子,將二塊平板玻璃夾牢,。墊片的厚度決定平板凝膠的厚度,,zui常用的是1.5mm厚。在平板凝膠膜中,,灌澆凝膠溶液至一定高度后,,插入加樣梳,就可制成加樣槽,。加樣槽體積的大小決定于加樣梳齒的大小,。因此,利用改變加樣梳齒的多少和大小,,就可方便地獲得需要的加樣槽,。
水平板型電泳槽是目前進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳使用zui普遍的裝置。水平板型凝膠通常在一塊可安放電泳槽平臺的玻璃板或兩側(cè)帶有擋板的膠模上灌制,。如用玻璃板,,則灌膠前需用膠帶紙或醫(yī)用膠帶將四周貼成一個圍墻,以防膠液滲漏,。如使用與電泳槽配套購置的制膠模,,則只需在灌膠前封住兩端。
電泳類型:濾紙電泳,、醋酸纖維素膜電泳,、淀粉凝膠電泳、瓊脂糖凝膠電泳,、免疫電泳,、聚丙烯酰胺凝膠電泳等,。
電泳目的:電泳技術(shù)廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)、氨基酸,、核酸,、酶、多肽,、激素類,、嘧啶和其他有機(jī)化合物甚至無機(jī)離子的分離、鑒定,、純化,、制備。
電泳技術(shù)使用領(lǐng)域:凡涉及到生物科學(xué),、生物技術(shù),、生物制藥、生物工程(遺傳工程,、細(xì)胞工程,、蛋白質(zhì)工程)的高校,如生命科學(xué)學(xué)院,、農(nóng)學(xué)院,、醫(yī)學(xué)院,及有科研能力的醫(yī)院,、生物工程公司等都離不開電泳技術(shù),。
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