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凝膠電泳常見問題分析

閱讀:2396      發(fā)布時間:2015-4-23
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要跑瓊脂糖凝膠電泳, 5ng 就能很清楚的跑出來是這樣嗎,?能夠照相的清楚的條帶,,至少需要多少量呢?
參考見解:5ng 已經(jīng)可以了,,但是或許20ng50ng-200ng效果好,,在此范圍內(nèi)呈線性。

把210bp的pcr產(chǎn)物進行酶切,得到190+20bp的兩個片段,請問能用瓊脂糖凝膠電泳檢測酶切結(jié)果嗎?用多大濃度的膠和多大的電壓呢?
參考見解:可以用瓊脂糖凝膠電泳分開,電壓不變,可用1.5%到2%的膠,20bp得片斷不一定能看得到,所以應用未酶切的PCR片斷作對照.


瓊脂糖濃度(W/V)



大小范圍(bp)



0.6%



1000-23000



0.8%



800-10000



1.0%



400-8000



1.2%



300-7000



1.5%



200-4000



2%



100-3000



丙烯酰胺凝膠電泳更適合于分離純化小分子量核酸(5-500bp)并且分辨率高,,可以達到1個bp,。所以建議進行丙烯酰胺凝膠電泳試試。

Marker做瓊脂糖凝膠電泳,,發(fā)現(xiàn)Marker在加樣孔有一個明顯的亮帶,,什么原因?
參考見解:marker有時會出現(xiàn)這樣的問題,應該是時間久了,。新買時跑膠在點樣孔沒有,過一段時間就會在點樣孔出現(xiàn)亮點,。也可能是蛋白,有時DNA提的不純含有蛋白時就會出現(xiàn)上樣孔有條帶的現(xiàn)象,。

瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA時,跑出的帶后面出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象,什么原因造成的?
參考見解: DNA帶模糊??:
1,、 DNA降解??避免核酸酶污染。
2,、 DNA上樣量過多??減少凝膠中DNA上樣量,。
3、 所用電泳條件不合適??電泳時電壓不應超過20V/cm,,溫度<30℃,巨大DNA鏈,,溫度應<15℃,,核查所用電泳緩沖液是否有足夠的緩沖能力。
4,、 DNA樣含鹽過高??電泳前通過乙醇沉淀去除過多的鹽,。
5、 有蛋白污染??電泳前酚抽提去除蛋白,。
6,、 DNA變性,?電泳前勿加熱,,用20mM NaCl緩沖液稀釋DNA,。

將從組織提取的DNA進瓊行脂糖凝膠電泳,用的1.5%的膠加了EB,,80V跑1小時,,溴酚藍已經(jīng)跑到頭了,在紫外燈觀察什么帶也沒有,,只見孔里面有橘紅色的亮光,。好象沒跑出來,是怎么回事,?

參考見解:
1,、 根據(jù)目的條帶長度來調(diào)整凝膠濃度,一般1.5%左右,,也不一定,。
2、 紫外燈下沒見帶,,不一定沒有出孔,,而是量少看不到,可以測一下濃度看一下,,或直接試跑一下PCR,。
3、 加一個marker孔,,尤其你*次跑膠時,。
4、 電泳時間可能過長,,一般75v×30min左右,,但是具體看溴酚藍的離孔距離和目的條帶離孔距離。

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