成像設(shè)備是生物實(shí)驗(yàn)室zui為常用的儀器之一，直接為您的論文提供影像依據(jù),。而這些影像質(zhì)量的好壞,，有時(shí)候甚至決定著您的論文能否發(fā)表。擁有一臺(tái)好的,、運(yùn)行穩(wěn)定的設(shè)備也是導(dǎo)師和技術(shù)主管的心愿,。那么，如何從紛繁的市場(chǎng)上選擇到一款好的成像設(shè)備呢,？很多號(hào)稱“"的設(shè)備是否真的能夠打滿分呢？本文教您選擇成像系統(tǒng)的三大要要點(diǎn)：
要點(diǎn)一：實(shí)踐出真知,，試用才知道
每個(gè)成像設(shè)備廠家都對(duì)自己的產(chǎn)品是“王婆賣(mài)瓜,，自賣(mài)自夸"，經(jīng)常給您上兩個(gè)小時(shí)課中間還不用休息,，什么“技術(shù)",、“人性化設(shè)計(jì)"、“生命科學(xué)產(chǎn)業(yè)大獎(jiǎng)",。只有您想不到的,，沒(méi)有他做不到的，可是,，這些東西對(duì)用戶到底有什么意義,？就沒(méi)有幾個(gè)人說(shuō)得清了！好用才是硬道理,！任憑你說(shuō)得天花亂墜,，拿來(lái)我試試，不就什么都清楚了,！現(xiàn)在多數(shù)廠商都提供Demo機(jī)服務(wù),，還有技術(shù)人員現(xiàn)場(chǎng)答疑解惑,，那就請(qǐng)各位上場(chǎng)， 誰(shuí)的性能好,，價(jià)格優(yōu),，那我就要誰(shuí)的！
當(dāng)然,，我們的實(shí)際測(cè)試結(jié)果僅僅是針對(duì)我們自己的樣品和現(xiàn)場(chǎng)demo的機(jī)器而已,。我們不能據(jù)此對(duì)相關(guān)品牌和相關(guān)型號(hào)做太多評(píng)判。由于具體應(yīng)用的限制,、操作技巧的差異以及可能的儀器狀態(tài)的區(qū)別,，我們有可能沒(méi)有給出公允的評(píng)價(jià)。但無(wú)論如何,，這些訊息對(duì)我們采購(gòu)者和使用者來(lái)說(shuō)都是非常重要的,。
要點(diǎn)二：只選符合自己實(shí)驗(yàn)室要求的設(shè)備
市場(chǎng)上各品牌、各型號(hào)的成像設(shè)備林林種種,，從成像原理上可以分成兩大類(lèi),，分別是拍照成像和掃描成像。拍照成像簡(jiǎn)單說(shuō)就是樣品和相機(jī)的相對(duì)位置不動(dòng),，可以進(jìn)行單次成像或多次成像,；而掃描成像則是相機(jī)對(duì)樣品進(jìn)行局部成像，然后通過(guò)樣品或相機(jī)的移動(dòng)對(duì)整個(gè)樣品進(jìn)行成像,。拍照成像目前主要采用CCD相機(jī)成像,，由于可以設(shè)置不同的曝光時(shí)間，常被用來(lái)進(jìn)行微弱的化學(xué)發(fā)光及生物發(fā)光的成像,。而掃描成像則由于精度高,、重復(fù)性好被廣泛用于大型樣品以及多通道成像中?？梢哉f(shuō),，對(duì)于大型樣品或多通道應(yīng)用，能選擇掃描成像的,，盡量不要選擇拍照成像,！原理搞清楚了，選擇起來(lái)就簡(jiǎn)單了,！不同的原理導(dǎo)致了不同應(yīng)用的*選擇,，所以千萬(wàn)不要相信什么“王"之類(lèi)的話，沒(méi)有任何一款機(jī)器可以通吃所有應(yīng)用領(lǐng)域,。
下面就實(shí)驗(yàn)室zui常見(jiàn)的一些應(yīng)用簡(jiǎn)單的說(shuō)明選擇的依據(jù)：
蛋白電泳凝膠：一般此類(lèi)凝膠采用考染或銀染,，白光透射成像。對(duì)于小型凝膠您可以選擇一般的凝膠成像設(shè)備，但是對(duì)于大型凝膠,，特別是雙向電泳凝膠,，由于CCD拍照成像會(huì)有幾何扭曲，而且透鏡效應(yīng)也會(huì)導(dǎo)致不同區(qū)域的信號(hào)強(qiáng)度差異,，另外CCD拍照也無(wú)法保證不同凝膠的成像參數(shù)保持一致,，因此掃描成像是選擇。
核酸電泳凝膠：一般此類(lèi)凝膠都采用EB染色,、紫外激發(fā),，而且凝膠較小。推薦采用一般的凝膠成像設(shè)備即可完成,。
轉(zhuǎn)印膜：一般轉(zhuǎn)印膜有比色法顯色,、同位素、化學(xué)發(fā)光和熒光等不同檢測(cè)手段,。比色法顯色就是產(chǎn)生有顏色的條帶或斑點(diǎn),，一般采用普通的凝膠成像設(shè)備即可；同位素可以采用壓膠片曝光的方法,，但是費(fèi)時(shí),、費(fèi)力而且容易過(guò)飽和，比較通用的方法是由FujiFilm在1981年發(fā)明的磷屏成像技術(shù),，獲得信號(hào)潛影的磷屏通過(guò)激光掃描就可以獲取同位素的信號(hào),。而化學(xué)發(fā)光是目前zui常用的蛋白印跡的檢測(cè)手段，無(wú)疑,，冷CCD拍照成像對(duì)這種微弱的光信號(hào)是zui合適的,。熒光是所有這些檢測(cè)手段中zui令人贊嘆的和zui有前景的！這不僅僅是因?yàn)闊晒馊玖暇哂衵ui寬的動(dòng)態(tài)范圍,，而且還在于它能夠?yàn)槲覀兲峁┒嗤返臋z測(cè)途徑,。當(dāng)然，您可以使用單一熒光檢測(cè),，這時(shí)您對(duì)凝膠成像設(shè)備的要求就包括了新的激光光源和相應(yīng)的濾光片,。如果您是一個(gè)主義者,，或者您需要對(duì)鄰近或重疊的目標(biāo)分子進(jìn)行成像,，那么多通道熒光檢測(cè)是您的*！這時(shí)掃描成像是*選擇,，這樣選擇不僅僅是因?yàn)閽呙璩上衲軌驇?lái)更高的靈敏度和分辨率,，更重要的是，不同通道之間沒(méi)有幾何扭曲,，擬合性好,。
微孔板及其他特殊需求：對(duì)于拍照成像而言，由于幾何扭曲的問(wèn)題，對(duì)微孔板成像就變得比較復(fù)雜了,，一般必須一個(gè)的校正裝置才可完成,。當(dāng)然，如果采用掃描成像一般不需要任何額外附件,。很多實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)在都對(duì)小動(dòng)物成像非常感興趣,，然而對(duì)小動(dòng)物進(jìn)行真的不是一件簡(jiǎn)單的事，一方面小動(dòng)物需要進(jìn)行麻醉和固定,；另一方面還需要對(duì)信號(hào)位置進(jìn)行三維定位,。因此，能同時(shí)提供功能,、代謝和解剖圖像的PET/CT是進(jìn)行這類(lèi)成像的zui有力的工具,。限于篇幅，這部分將不做更多介紹,。
要點(diǎn)三 參數(shù)細(xì)節(jié)很重要
當(dāng)我們?cè)诳疾靸x器Demo的情況后還是無(wú)法分辨其性能之優(yōu)劣時(shí),，除了可以了解兄弟科室的使用情況和評(píng)價(jià)，就只能推開(kāi)儀器看參數(shù)了,。當(dāng)然看參數(shù)是有竅門(mén)的,。很多成像儀的參數(shù)寫(xiě)了幾十條，其實(shí)zui關(guān)鍵的就那么幾條,。我們對(duì)比不同廠商的參數(shù)時(shí)一定要注意只比關(guān)鍵的,，而對(duì)那些無(wú)關(guān)痛癢的參數(shù)則大可以視而不見(jiàn)！另外,，千萬(wàn)不要被廠商自己給相應(yīng)產(chǎn)品的評(píng)分所欺騙,，他的那套評(píng)分系統(tǒng)僅僅是相對(duì)自己的產(chǎn)品而言，即使給出了zui高分“5"分的指標(biāo),，和其他廠商產(chǎn)品的性能相比,，可能還是屬于垃圾級(jí)的！
對(duì)于掃描成像而言,，靈敏度一般不是問(wèn)題,，我們zui關(guān)注的應(yīng)該是分辨率，當(dāng)然分辨率只要達(dá)到我們的要求即可,，對(duì)于小型的凝膠,、膜和微孔板來(lái)說(shuō)，一般分辨率在25um左右應(yīng)該是足夠了,！在滿足分辨率后,，一個(gè)更重要的參數(shù)擺在我們的面前，那就是動(dòng)態(tài)范圍,，簡(jiǎn)單的說(shuō),，動(dòng)態(tài)范圍決定著你能否同時(shí)在一張膠上同時(shí)看到強(qiáng)的信號(hào)和弱的信號(hào),，而且他們之間保持比較好的定量關(guān)系！一般動(dòng)態(tài)范圍采用數(shù)量級(jí)來(lái)表示,，這個(gè)數(shù)越大,，表明動(dòng)態(tài)范圍越寬！
對(duì)于激光掃描成像系統(tǒng),，情況就復(fù)雜一些,。從激光器、濾光片到分光鏡和檢測(cè)器還有好多需要考慮和比較的,。同樣限于篇幅,，以后在做詳細(xì)介紹。
下面主要介紹實(shí)驗(yàn)室zui常用的凝聚成像儀的參數(shù)選擇,。根據(jù)原則一,，如果您主要用它來(lái)拍普通核酸膠或蛋白膠，那么幾乎市場(chǎng)上所有的成像儀都可以很好的滿足您的需求,，這時(shí)除了價(jià)格這個(gè)決定因素外,，能比較的也就是一些諸如“操作是否簡(jiǎn)便、外形是否時(shí)尚"等無(wú)關(guān)痛癢的指標(biāo)了,！真正需要花心思考察的可能就是準(zhǔn)備做化學(xué)發(fā)光的用戶,，他們對(duì)敏感度要求高，同時(shí)還要求比較寬的動(dòng)態(tài)范圍,。
要想捕獲到微弱的化學(xué)發(fā)光,，需要上佳的CCD相機(jī)和鏡頭。一般來(lái)說(shuō),，CCD相機(jī)的冷卻溫度和背景噪音息息相關(guān),，溫度越低，噪音就越低,。因此,，-25℃的制冷溫度是對(duì)相機(jī)的*個(gè)要求（更低的溫度，噪音降低效果不明顯,，而量子效率又會(huì)受很大影響）,；另外，較大的像素能夠提供更高的捕光效率,；所以對(duì)于相同大小的CCD芯片,，需要注意像素的尺寸。鏡頭的參數(shù)就簡(jiǎn)單了,，由于我們只需要觀察近距離的樣品而且一般可以調(diào)整樣品位置（有些廠家甚至提供電動(dòng)樣品升降平臺(tái)）,，所以基本無(wú)需選擇長(zhǎng)鏡頭或者變焦鏡頭,；但是,，由于我們需要檢測(cè)微弱的化學(xué)發(fā)光,，鏡頭的光圈則至關(guān)重要，一般F值越小,，其通光量越大,，而且成平方反比關(guān)系，因此我們一般需要選擇光圈F值盡量小的鏡頭,。另外,，如果鏡頭是電動(dòng)的，我們可以省卻打開(kāi)機(jī)箱,，反復(fù)手工調(diào)整光圈和聚焦等的煩惱,。
其他我們需要考慮的包括光源、濾光片和暗箱等部件,。光源的種類(lèi)和發(fā)光的均一度,，濾光片的數(shù)量和暗箱的遮光效果等均在我們的考慮范圍之內(nèi)。當(dāng)然,，一般如果成像儀的CCD和鏡頭配置不錯(cuò),，一般這些部件也不會(huì)太差。
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