那么下面上海金鵬分析儀器有限公司為大家簡單介紹一下關(guān)于核酸濃度測量的230,、260,、280：
在核酸、蛋白濃度檢測過程中,，230nm,、260nm、280nm這幾個(gè)數(shù)值經(jīng)常會出現(xiàn),，那這幾個(gè)數(shù)值代表什么,？他們之間的*優(yōu)關(guān)系又是什么呢？
數(shù)值的意義：
230nm：碳水化合物*高吸收峰的吸收波長,，與A260的比值可進(jìn)行核酸樣品純度評估,。A230產(chǎn)生負(fù)值可能是由于在低核酸濃度的樣液中存在一些干擾成分。
260nm：核酸*高吸收峰的吸收波長,，其吸收紫外光的性質(zhì)是嘌呤環(huán)和嘧啶環(huán)的共軛雙鍵系統(tǒng)所具有的,，所以嘌呤和嘧啶以及一切含有它們的物質(zhì)，不論是核苷,、核苷酸或核酸在260nm處都會一個(gè)*高吸收峰,。
280nm：蛋白質(zhì)由于含有芳香氨基酸，因此也能吸收紫外光,，通常蛋白質(zhì)的吸收高峰在280nm波長處,。其與260nm處的吸光度比值，經(jīng)常被用于判斷核酸樣品的純度,。
除了這三個(gè)常見的波長外,，在核酸檢測過程中340nm往往會被用來檢測樣品緩沖液的濁度和其他干擾因子,。該值應(yīng)該接近0.0，如果不是,，表明溶液中有懸浮物,。
圖為 核酸、蛋白質(zhì)吸光度譜
比值的意義：
260/230,、260/280
純度好的DNA或RNA,，在pH7-8.5下：
A260 / A280比值應(yīng)大于1.8（DNA）或者2.0（RNA）。
如果比值低于1.8 或者2.0,，表示存在蛋白質(zhì)或者酚類物質(zhì)的影響,。
較純凈的核酸A260/A230的比值一般在1.8-2.2之間。
比值降低往往是樣品中存在一些污染物,，如碳水化合物,、鹽（胍鹽）等。
但實(shí)際樣品情況往往要相對復(fù)雜,，如《分子克隆實(shí)驗(yàn)指南》(第三版)所述,，當(dāng) 0.5％BSA蛋白質(zhì)污染時(shí)，A260和A280的數(shù)值都下降,，其結(jié)果是260/280的比值略微下降,。但同時(shí)，蛋白殘留會導(dǎo)致A230的數(shù)值明顯上升,，進(jìn)而顯著影響260/230的比值,。也就是說，如果樣品的260/280比值略低于標(biāo)準(zhǔn)值,，但260 /230下降明顯,，那么就應(yīng)該考慮污染原因是蛋白殘留，而不是胍鹽殘留,。
酚的*大吸收峰在270nm,。酚的殘留會增加A230、A260和A280的數(shù)值,，同時(shí)酚的吸收峰與核酸的吸收峰合并后,，*大吸收峰會出現(xiàn)在270nm附近。因此當(dāng)樣品*大吸收峰會出現(xiàn)在270nm附近,，且260/280=1~1.5, 260/230=1~1.5,，那么污染原因就應(yīng)該考慮是酚殘留。
胍鹽會在小于230nm處產(chǎn)生大的吸收峰,，進(jìn)而顯著影響260/230比值,，但胍鹽殘留不會影響A260、A280的數(shù)值,，以及260/280的比值,。也就是說,，如果核酸樣品的260/280符合要求，但260/230<1,，那么污染原因就應(yīng)該考慮是胍鹽殘留,。
以上就是上海金鵬分析儀器有限公司為大家整理總結(jié)關(guān)于核酸濃度測量的230、260,、280,。
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