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那么下面上海金鵬分析儀器有限公司為大家簡(jiǎn)單介紹一下關(guān)于蛋白純化系統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)方法與步驟:
凝膠過(guò)濾層析（gel filtration chromatography）法又稱排阻層析或分子篩方法，主要是根據(jù)蛋白質(zhì)的大小和形狀,，即蛋白質(zhì)的質(zhì)量進(jìn)行分離和純化,。層析柱中的填料是某些惰性的多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)物質(zhì)，多是交聯(lián)的聚糖類物質(zhì),，使蛋白質(zhì)混合物中的物質(zhì)按分子大小的不同進(jìn)行分離,。
蛋白純化系統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)方法
蛋白質(zhì)的凝膠過(guò)濾分離
實(shí)驗(yàn)材料 蛋白質(zhì)  
試劑、試劑盒 凝膠過(guò)濾緩沖液  
儀器,、耗材 布氏漏斗 凝膠過(guò)濾層析柱 分光光度計(jì)
 
蛋白純化系統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)步驟
1.  如果凝膠過(guò)濾的介質(zhì)是干粉,，則需在凝膠過(guò)濾緩沖液中*溶脹。
2.  在遠(yuǎn)離過(guò)往通道及直接光照的恒溫環(huán)境,，將層折柱垂直安裝在穩(wěn)固的實(shí)驗(yàn)室支架上,。
3.  用一注射器將凝膠過(guò)濾緩沖液從柱子的輸出管注入柱子，至緩沖液達(dá)到柱子支持體平面之上,，注射器留在輸出端以堵住柱子,。
4.  沿著一根順柱子內(nèi)壁而放的玻璃棒將凝膠混懸物倒入柱子至所設(shè)高度，再小心往凝膠頂部加入1 cm 高的一層緩沖液,，并連接緩沖液貯存容器,，取去堵著柱子輸出管的注射器，用2~3倍柱床體積的緩沖液請(qǐng)洗柱子,。
5.  流盡柱子凝膠頂部上面的緩沖液,、關(guān)閉其輸出管。
6.  加入相當(dāng)于柱床體積1%~5%的蛋白質(zhì)樣品,。開(kāi)放輸出管,，讓樣品流進(jìn)柱床，凝膠上面的柱子內(nèi)壁以緩沖液沖洗,。
7.  在凝膠頂上用吸管加入1 cm 高的緩沖液層,，重新與緩沖液貯存容器連接，開(kāi)始洗脫,。
8.  分部收集流出液,。每分部相當(dāng)于1%總柱床體積，分別測(cè)每個(gè)分部的A280,，并各取小份樣品測(cè)生物活性,，選出有活性的分部用SDS-PAGE檢測(cè)所含蛋白質(zhì)的數(shù)量和質(zhì)量，合并含目標(biāo)蛋白的分部,。
9.  用2~3個(gè)柱床體積的凝膠過(guò)濾緩沖液洗柱,，柱子保存在含0.02%疊氮鈉的緩沖液中,，柱于可無(wú)限次地使用。
 
以上就是上海金鵬分析儀器有限公司為大家整理總結(jié)關(guān)于蛋白純化系統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)方法與步驟,。
 
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