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液相色譜系統(tǒng)的組成及保養(yǎng)知識(shí)

閱讀:2597      發(fā)布時(shí)間:2017-7-19
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一套液相色譜系統(tǒng)大致分為以下幾個(gè)部分:流動(dòng)相前處理部分,、輸液部分、進(jìn)樣部分,、分離部分,、檢測(cè)部分。

 

一,、流動(dòng)相前處理

流動(dòng)相前處理主要包括過(guò)濾和脫氣,,使用設(shè)備主要為溶劑過(guò)濾器、真空泵和超聲波。

1,、過(guò)濾,。HPLC所用流動(dòng)相必須預(yù)先過(guò)濾和脫氣,過(guò)濾的作用是防止顆粒性的雜質(zhì)堵塞系統(tǒng),,或影響單向閥的正常工作,。過(guò)濾時(shí)需要注意濾膜的選擇,油膜和水系膜必須分開(kāi)使用,。水膜易有機(jī)溶劑溶解而進(jìn)入系統(tǒng)導(dǎo)致泵流路和色譜柱頭的堵塞,。

2、超聲,。超聲的作用是去除流動(dòng)相中的氣泡,。超聲時(shí)間一般在20min即可。超聲后,,液體溫度會(huì)升高,,應(yīng)冷卻到室溫再使用。超聲后的流動(dòng)相若需隔天使用再次超聲,。

 

二,、輸液系統(tǒng)

輸液系統(tǒng)即是指高壓恒流泵,其作用是能提供穩(wěn)定準(zhǔn)確的流速,。

1,、溶劑過(guò)濾頭。吸液過(guò)濾頭,,或稱(chēng)沉子,,主要作用是過(guò)濾流動(dòng)相中可能存在的顆粒性雜質(zhì)。長(zhǎng)時(shí)間使用后,,雜質(zhì)有可能阻塞溶劑過(guò)濾頭上的過(guò)濾板孔隙,;或長(zhǎng)時(shí)間使用緩沖液,過(guò)濾頭表面容易產(chǎn)生一層膜,,阻礙流動(dòng)相正常通過(guò),。嚴(yán)重時(shí),即使是已超聲過(guò)的溶劑,,泵吸液時(shí)也會(huì)有氣泡在四氟輸液管里產(chǎn)生,因此應(yīng)經(jīng)常對(duì)過(guò)濾頭進(jìn)行清洗,。清洗溶劑可以選擇乙醇或者30%稀硝酸溶液,,正相系統(tǒng)需注意濾頭的烘干處理。

2,、單向閥,。單向閥的作用是確保液體向一個(gè)方向流動(dòng),是高壓恒流泵穩(wěn)定輸液的保證。日常使用過(guò)程中,,可以通過(guò)觀察壓力的情況,,初步判斷流量是否正常。如果系統(tǒng)已經(jīng)平衡一段時(shí)間,,壓力應(yīng)該是穩(wěn)定的,。但如果壓力存在波動(dòng),則表明流量不穩(wěn)定,;如果無(wú)壓力,,則表明無(wú)流量。這兩種情況大多是因?yàn)閱蜗蜷y里混入了氣泡或雜質(zhì),?;烊霘馀莸那闆r,應(yīng)把放空閥打開(kāi),,按沖洗鍵將里面的氣泡排出,。單向閥混入雜質(zhì)的情況,須對(duì)其進(jìn)行清洗,。清洗溶劑可以選擇乙醇,,安裝時(shí)注意標(biāo)記環(huán)的方向。 單向閥裝配圖及剖面圖 1 帶標(biāo)記環(huán)閥外套,;2 陶瓷座,;3 寶石球;4 帶密封墊限位套,;5 密封墊

3,、密封圈。密封圈是固定在柱塞桿上防止泵腔內(nèi)的液體泄漏,,是保證泵頭輸液正常的關(guān)鍵部件,。但柱塞桿和柱塞密封圈長(zhǎng)期使用會(huì)發(fā)生磨損,主要與流量,、操作壓力和所使用的流動(dòng)相有關(guān),。當(dāng)使用含鹽的流動(dòng)相時(shí),由于脫水或蒸發(fā),,可能形成鹽結(jié)晶,,而泵運(yùn)動(dòng)時(shí)鹽結(jié)晶會(huì)導(dǎo)致密封圈和柱塞桿的磨損。因此,,每天實(shí)驗(yàn)前和實(shí)驗(yàn)后都需用純水沖洗一次密封圈(在柱塞密封圈和二級(jí)密封圈之間),,保持清洗管內(nèi)有水以防止形成晶體,延長(zhǎng)柱塞桿和密封圈的使用壽命,。 等度系統(tǒng) 梯度系統(tǒng) 柱塞桿清洗連接示意圖

4,、在線(xiàn)過(guò)濾器,。為了防止由于流動(dòng)相雜質(zhì)微粒進(jìn)入色譜系統(tǒng),泵在放空閥內(nèi)安裝了在線(xiàn)過(guò)濾器,,經(jīng)泵出口流出的液體通過(guò)在線(xiàn)過(guò)濾器,,經(jīng)排空管流出的液體不通過(guò)在線(xiàn)過(guò)濾器。儀器使用一定時(shí)間后,,建議用戶(hù)清洗在線(xiàn)過(guò)濾器的燒結(jié)不銹鋼過(guò)濾片,。用扳手卸下壓帽,將密封環(huán)和燒結(jié)不銹鋼過(guò)濾片一同取出清洗,,清洗后按原位裝上,。清洗溶劑可以選擇30%稀硝酸溶液,正相系統(tǒng)需注意濾頭的烘干處理,。

 

三,、進(jìn)樣系統(tǒng)

進(jìn)樣系統(tǒng)分為手動(dòng)進(jìn)樣閥和自動(dòng)進(jìn)樣器。

1,、手動(dòng)進(jìn)樣閥,。對(duì)于手動(dòng)進(jìn)樣閥使用過(guò)程中需要注意每個(gè)樣品進(jìn)樣完成后應(yīng)對(duì)進(jìn)樣閥進(jìn)行清洗,防止殘留對(duì)下一個(gè)樣品分析的影響,。還需要注意進(jìn)樣方式,,以20μL定量環(huán)為例,我們可以選擇*充滿(mǎn)定量管或部分充滿(mǎn)定量管,。為了保證進(jìn)樣的重復(fù)性,,選擇*充滿(mǎn)定量管進(jìn)樣方式時(shí),需要注入定量環(huán)體積3倍以上的樣品,;選擇部分充滿(mǎn)定量管進(jìn)樣方式時(shí),,進(jìn)樣體積應(yīng)在定量管體積一半以下,即1-10μL,。

2,、自動(dòng)進(jìn)樣器。如果采用自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣,,首先需要保證注射器里面沒(méi)有氣泡存在,,否則影響進(jìn)樣量準(zhǔn)確性;其次是樣品瓶里面有足夠的樣品,,保證進(jìn)樣針能夠吸到樣品,。為了避免交叉污染需要定期對(duì)樣品瓶、蓋和墊進(jìn)行清洗,。若自動(dòng)進(jìn)樣器長(zhǎng)時(shí)間不使用,,應(yīng)該注意:腐蝕性的流動(dòng)相或洗液(例如,堿性或酸性緩沖溶液)必須*從系統(tǒng)中置換出來(lái),。同時(shí),為了避免細(xì)菌的生長(zhǎng),應(yīng)將一個(gè)樣品瓶中充滿(mǎn)甲醇,,并重復(fù)幾次進(jìn)樣操作,。

 

四、分離系統(tǒng)

分離系統(tǒng)包括色譜柱,、保護(hù)柱以及柱溫箱,。

1、色譜柱,。色譜柱是樣品分離的核心,。色譜柱在使用前必須仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū),了解色譜柱使用的pH值范圍,、溶劑耐受范圍,、壓力范圍和維護(hù)方法等事項(xiàng)。色譜柱使用完后,,需及時(shí)對(duì)色譜柱進(jìn)行沖洗,。沖洗完成后,應(yīng)該將色譜柱從儀器上拆下來(lái),,兩端用廠家配的堵頭密封后,,保存在色譜柱盒里。

2,、保護(hù)柱,。保護(hù)柱的作用主要是防止吸附性強(qiáng)的雜質(zhì)對(duì)色譜柱污染,從而延長(zhǎng)色譜柱的壽命,。針對(duì)不同型號(hào)的色譜柱,,應(yīng)選擇相對(duì)應(yīng)填料的保護(hù)柱。應(yīng)注意柱芯也是有壽命的,,應(yīng)該定期進(jìn)行更換,。

3、柱溫箱,。色譜柱溫度變化,,可能會(huì)導(dǎo)致保留時(shí)間的變化。為了避免這個(gè)問(wèn)題,,建議使用柱溫箱,。

 

五、檢測(cè)系統(tǒng)

HPLC常用的檢測(cè)器是紫外檢測(cè)器,。在日常使用過(guò)程中紫外檢測(cè)器主要需要注意檢測(cè)池和氘燈的使用與維護(hù),。

1、檢測(cè)池,。檢測(cè)池長(zhǎng)時(shí)間使用可能會(huì)造成污染,,如果儀器的參比能量(REF ENERGY)正常,,測(cè)量能量(SMP ENERGY)偏低,可能為檢測(cè)池污染導(dǎo)致,,可以對(duì)檢測(cè)池進(jìn)行清洗,。對(duì)檢測(cè)池零件的進(jìn)行清洗,一般先采用約1:4的硝酸溶液超聲清洗,,分別用純水和甲醇溶液清洗,,然后重新組裝并將檢測(cè)池池體推進(jìn)池腔內(nèi),擰緊池板螺絲,。注意組裝中,,池玻璃及墊片一定要放正,以免壓碎池玻璃,,造成檢測(cè)池泄漏,。

2、氘燈,。氘燈正常使用壽命可在1500小時(shí)以上,。燈的使用壽命與檢測(cè)器的使用時(shí)間和開(kāi)啟頻率有關(guān),因此使用過(guò)程中應(yīng)盡量節(jié)省不必要的開(kāi)機(jī)時(shí)間,,減少開(kāi)關(guān)頻率,,以延長(zhǎng)氘燈的使用壽命。如果準(zhǔn)確地判斷出氘燈已經(jīng)不能點(diǎn)亮或能量太低,,則需要更換新的氘燈,。在購(gòu)買(mǎi)氘燈時(shí),應(yīng)注意咨詢(xún)和核對(duì)氘燈的型號(hào)與儀器型號(hào)是否匹配,。更換到氘燈時(shí),,參照儀器說(shuō)明書(shū)中的相關(guān)內(nèi)容,特別要注意氘燈連接線(xiàn)的位置順序,。

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