1、氣泡溢出
流動相內(nèi)有氣泡,,關(guān)閉泵,,打開泄壓閥,打開purg鍵,,清洗脫氣,,氣泡不斷從過濾器冒出,進(jìn)入流動相,,無論打開purge鍵幾次,,都無法清除不斷產(chǎn)生的氣泡。原因過濾器長期沉浸于乙酸銨等緩沖液內(nèi),,過濾器內(nèi)部由于霉菌的生長繁殖,,形成菌團(tuán),阻塞了過濾器,,緩沖液難以流暢地通過過濾器,,空氣在泵的壓力作用下經(jīng)過濾器進(jìn)入流動相。處理過濾器浸泡于5%硝酸溶液中,,超聲清洗幾分鐘即可,;亦可將過濾器浸泡于5%硝酸溶液中12~36小時,輕輕震蕩幾次,,再將過濾器用純水清洗幾次,,打開泄壓閥,打開purge鍵清洗脫氣,,如仍有氣泡不斷從過濾器冒出,,繼續(xù)將過濾器浸泡于5%硝酸溶液中,,如沒有氣泡不斷從過濾器中冒出,說明過濾器內(nèi)部的霉菌菌團(tuán)已被硝酸破壞,,流動相可以流暢地通過過濾器。打開泄壓閥,,打開泵,,流速調(diào)至1.0~3.0ml/min,純水沖洗過濾器1小時左右,。即可將過濾器清洗干凈,。關(guān)閉泄壓閥,純甲醇沖洗半小時即可,。
2,、峰面積重復(fù)性不佳
(1)進(jìn)樣閥漏液。
(2)加樣針不到位,。
(3)液量不足,。處理對于*種情況更換進(jìn)樣閥墊圈;對于第二種情況保證加樣針插到底,,注射樣品溶液后須快速,、平穩(wěn)地從LOAD狀態(tài)轉(zhuǎn)換到INJECT狀態(tài),以保證進(jìn)樣量的準(zhǔn)確,。日常工作中,,液相色譜儀的保養(yǎng)非常重要,如要注意不要讓空氣進(jìn)入輸液系統(tǒng)和高壓泵中,,儲液器內(nèi)的溶液如長時間未用應(yīng)清洗儲液器并更換溶液,,每次用完色譜儀后緩沖液要用純水沖洗干凈,防止無機(jī)鹽析出或沉積,;樣品的前處理也很重要,,任何樣品都要盡可能地去除雜質(zhì),*溶解,,盡量減少對色譜柱的污染,,以延長色譜柱的使用壽命,同時避免注射過濃的樣品溶液,,以免殘留液在進(jìn)樣閥內(nèi)析出固體引起堵塞,;色譜柱作好標(biāo)記,用于不同分析目的的色譜柱不要混用等,。
3,、柱壓高原因
(1)緩沖液鹽分如(乙酸銨等)沉積于柱內(nèi)。
(2)樣品污染沉積,。處理對于*種情況先用40~50℃的純水,,低速正向沖洗柱子,,待柱壓逐漸下降后,相應(yīng)提高流速沖洗,,柱壓大幅度下降后,,用常溫純水沖洗,之后用純甲醇沖洗柱子30分鐘,;對于第二種情況,,由樣品的沉積引起污染的C18柱,和純水反向沖洗柱子,,然后換成甲醇沖洗,,接著用甲醇+異丙醇(4+6)沖洗柱子(沖洗時間的長短由樣品污染的情況而定),再用換成甲醇沖洗,,然后用純水沖洗,,zui后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上。
4,、既無壓力指示,,又無液體流過
(1)泵密封墊圈磨損。
(2)大量氣泡進(jìn)入泵體,。處理對于*種情況,,更換密封墊圈;對于第二種情況,,在泵作用的同時,,用一個50ml的玻璃針筒在泵的出口處幫助抽出空氣。
5,、壓力波動大,,流量不穩(wěn)定
原因系統(tǒng)中有空氣或者單向閥的寶石球和閥座之間夾有異物,使得兩者不能密封,。處理工作中注意觀察流動相的量,,保證不銹鋼濾器沉入儲液器瓶底,避免吸入空氣,,流動相要充分脫氣,。如為單向閥和閥座之間夾有異物,拆下單向閥,,放入盛有丙酮的燒杯用超聲波清洗,。
6、出峰不佳,,峰分叉
(1)色譜柱被污染,。
(2)柱頭填料塌陷。處理對于*種情況,先用純水反向沖洗柱子,,然后換成甲醇沖洗,,接著用甲醇+異丙醇(4+6)沖洗柱子(沖洗時間的長短由樣品污染的情況而定),再換成甲醇沖洗,,然后用純水沖洗,,zui后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上。如沖洗后依然出峰不佳,,則考慮第二種情況,。對于第二種情況,擰開柱頭,,檢查柱填料是否硬結(jié)或塌陷。去除硬結(jié)部分(污染的填料),,裝入新填料,,滴一滴甲醇,填料下陷,,再填,,用與柱內(nèi)徑相同的頂端平滑的不銹鋼桿壓緊,再填平,,滴甲醇,,再壓緊反復(fù)幾次,直至裝滿填平,。柱頭用甲醇沖洗干凈,,擦凈柱外壁的填料,擰緊柱頭,,用純甲醇沖洗30分鐘以上,。
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