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1.探針的標記：
（1） 如下設(shè)置探針標記的反應(yīng)體系：
待標記探針 （1.75pmol/微升） 2微升
T4 Polynucleotide Kinase Buffer （10X） 1微升
Nuclease-Free Water 5微升
[γ-32P]ATP（3,000Ci/mmol at 10mCi/ml） 1微升
T4 Polynucleotide Kinase （5-10U/微升） 1微升
總體積 10微升
按照上述反應(yīng)體系依次加入各種試劑,，加入同位素后，Vortex混勻,，再加入T4 Polynucleotide Kinase,，混勻。
（2） 使用水浴或PCR儀,，37℃反應(yīng)10分鐘,。
（3） 加入1微升探針標記終止液，混勻,，終止探針標記反應(yīng),。
（4） 再加入89微升TE,混勻。此時可以取少量探針用于檢測標記的效率,。通常標記的效率在30%以上,，即總放射性的30%以上標 記到了探針上,。為實驗簡便起見,，通常不必測定探針的標記效率。
（5） 標記好的探針立即使用,，zui長使用時間一般不宜超過3天,。標記好的探針可以保存在-20℃。
2.探針的純化：
通常為實驗簡便起見,，可以不必純化標記好的探針,。在有些時候，純化后的探針會改善EMSA的電泳結(jié)果。如需純化,，可以按照如 下步驟操作：
（1） 對于100微升標記好的探針,，加入1/4體積即25微升的5M醋酸銨，再加入2體積即200微升的無水乙醇,，混勻,。
（2） 在-70℃至-80℃沉淀1小時，或在-20℃沉淀過一夜,。
（3） 在4℃,，12000g-16000g離心30分鐘。小心去除上清,，切不可觸及沉,。
（4） 在4℃，12000g-16000g離心1分鐘,。小心吸去殘余液體,。微晾干沉淀，但不宜過分干燥,。
（5） 加入100微升TE,，*溶解沉淀。標記好的探針立即使用,，zui長使用時間一般不宜超過3天,。標記好的探針可以保存于-20℃。