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選擇液相色譜柱簡單思路
1. 確定分離目的      確定你的應(yīng)用是否要求高分離度,、短分析時(shí)間,、高靈敏度、長柱壽命,，低的操作成本等等,。
2. 評(píng)估分析物的化學(xué)性質(zhì)      評(píng)估分析物的化學(xué)性質(zhì). . 諸如化學(xué)結(jié)構(gòu)、溶解性,、穩(wěn)定性等等,。
3. 選擇合適的色譜柱      了解色譜填料的物理和化學(xué)性質(zhì)。

A填料基質(zhì)

硅膠基質(zhì)：純度高成本低，強(qiáng)度大,，化學(xué)修飾容易,， 但pH值范圍有限。大多硅膠基質(zhì)填料在pH2-8之間穩(wěn)定,，但經(jīng)過特殊修飾的硅膠鍵合相可以穩(wěn)定在pH1.5-10,。
聚合物基質(zhì)：應(yīng)用pH值范圍寬，溫度穩(wěn)定（高溫可以達(dá)到80度以上）,，機(jī)械強(qiáng)度小,。
B顆粒形狀
    大多現(xiàn)代HPLC填料都是球形顆粒，但有時(shí)是不規(guī)則的顆粒,。球形顆粒提供較低的柱壓,、較高的柱效和穩(wěn)定性以及較長的柱壽命在使用高粘度的流動(dòng)相時(shí)；不規(guī)則顆粒有較大比表面積和相對(duì)低廉的價(jià)格,。

C顆粒粒徑

粒徑越小柱效越高,、分離度越高，但同時(shí)會(huì)導(dǎo)致較高柱壓降,。選擇1.5-3µm的填料以解決一些復(fù)雜樣品,UPLC可以使用1.5µm的填料,；另外10µm或更大粒徑的填料用作半制備或制備柱。

D 含碳量

含碳量指的是硅膠表面鍵合相的比例,，與比表面積和鍵合覆蓋度等有關(guān),。高含碳量提高柱容量、分辨率及分析時(shí)間,，用于要求高分離度的復(fù)雜樣品,；低含碳量分析時(shí)間短、展現(xiàn)不同的選擇性,，用于快速分析簡單樣品及需要高含水流動(dòng)相條件的樣品,。一般C18的含碳量在7-19%不等。

E孔徑和比表面積   

HPLC吸附介質(zhì)是多孔的顆粒,，絕大多數(shù)的反應(yīng)表面于孔內(nèi),。因此,，分子必須進(jìn)入孔內(nèi)才能被吸附和分離,。
孔徑和比表面積是相輔相成的兩個(gè)概念?？讖叫”缺砻娣e大,，反之亦然。比表面積大,，增加樣品與鍵合相之間的反應(yīng),，增加保留,上樣量和復(fù)雜成分的分離度；比表面積小，平衡時(shí)間快,，適合梯度分析,。

F孔容和機(jī)械強(qiáng)度

孔容，又稱“孔體積”,。 指單位顆粒的空隙體積大小,。它能很好的反應(yīng)填料的機(jī)械強(qiáng)度?？左w積大的填料相對(duì)孔體積小的填料機(jī)械強(qiáng)度要略弱,。孔體積為1.5mL/g  或更小的填料大多用于HPLC分離,，而孔體積大于1.5mL/g  的填料使用于尺寸排阻色譜和低壓色譜,。

G封端封端

封端能夠降低極性堿性化合物因?yàn)榕c裸露的硅醇基相互作用而產(chǎn)生的拖尾峰。不封端鍵合相相對(duì)封端鍵合相會(huì)產(chǎn)生不同的選擇性,，尤其是極性樣品,。

色譜填料分類（鍵合相）

1 s硅膠柱適用于能溶于有機(jī)溶劑的低分子量化合物的分離。硅膠柱上的分離與樣品中化合物的官能團(tuán)方
位,、類型和數(shù)量有關(guān),。在制備色譜技術(shù)中，正相色譜技術(shù)有很大優(yōu)勢,，因?yàn)榧兓院蟮臉悠分恍枰舭l(fā)掉溶劑即
可得到純凈化合物,，不象反相色譜那樣需要費(fèi)時(shí)的冷凍干燥。

2 ODS/C8/C4等反相柱

ODS使用單官能團(tuán)鍵合劑在優(yōu)化的條件下達(dá)到高密度鍵合覆蓋率的一種十八烷基鍵合相硅膠吸附劑,，耐用的小分子HPLC柱,，，C18柱常和水/甲醇或者水/乙腈流動(dòng)相結(jié)合使用,，對(duì)于疏水性不同的小分子,，蛋白質(zhì)和肽類等，具有出色的分離能力 ,。C8與C18色譜柱相同,，也是靠疏水性相互作用的機(jī)理分離樣品，但是保留能力減弱,。當(dāng)樣品極性太強(qiáng)或者疏水性太強(qiáng)而無法在C18柱上進(jìn)行色譜分析時(shí),，C8柱是一個(gè)很好的選擇。一些極性化合物在C8柱上能有更好的表現(xiàn),，由于C8鍵合相良好的表面覆蓋率,，像維生素、抗生素和堿性藥物通常在C8柱上的分離要比C18柱好,，而且峰形更加對(duì)稱,。

3NH2是一種氨丙基鍵合硅膠吸附相,，既能用于正相分析，又能用于反相分析,。氨基固定相的選擇性與
C18相比,，有很大差別，使得它對(duì)那些極難分析的極性化合可以達(dá)到理想的分析結(jié)果,。另外,，氨基柱與離子凝
膠柱相比，對(duì)糖類化合物表現(xiàn)出更高的分離效率,。此類應(yīng)用中的典型流動(dòng)相是乙腈/水,。在正相模式下的分離
類似于未鍵合的硅膠，但是梯度平衡的時(shí)間更短,，壽命更長,。

4 二苯基

適用于含有雙鍵和芳香基團(tuán)的化合物。與C18和苯基已烷鍵合相相比,，不是依靠疏水保留機(jī)理,，二苯基鍵合相主要是依靠化合物的π-電子結(jié)構(gòu)的不同來獲得分離。如果您需要在分析中提高芳香族和雙鍵化合物的選擇性,，提高分離度以及提高樣品通量,。

5氰基柱

氰丙基鍵合硅膠吸附相，它的*之處在于能同時(shí)用于正相和反相分離模式,。當(dāng)使用含水的有機(jī)流動(dòng)相時(shí),，分析物的洗脫順序和反相模式一致：極性化合物洗脫快，非極性化合物則被更多的保留,。因此氰基柱可以分析那些對(duì)C18柱來說疏水性太強(qiáng)而且在有機(jī)溶劑中溶解性不好的化合物,。氰基柱作為正相柱使用時(shí)，分離化合物的原理是基于極性相互作用,。