產(chǎn)品基本信息

Hyclone胎牛血清選擇指南

Hyclone胎牛血清FBS品牌介紹

Hyclone是美國GE公司的細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)品的品牌,。Hyclone胎牛血清（Foetal bovine serun，F(xiàn)BS）原料是來源于澳大利亞,，美國,，加拿大和南美洲的高質(zhì)量血源，即Hyclone胎牛血清南美,，Hyclone胎牛血清澳洲,，Hyclone胎牛血清北美。Hyclone公司擁有深厚的生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)血清的工業(yè)經(jīng)驗(yàn),。為了獲得高等級(jí)參數(shù)指標(biāo)的胎牛血清,，Hyclone采用了非常嚴(yán)格的質(zhì)量控制體系。

Hyclone公司的胎牛血清,，目前在國內(nèi)很多高校,、科研院所,、研發(fā)公司的細(xì)胞培養(yǎng)過程中獲得了非常廣泛的使用，產(chǎn)品質(zhì)量也贏得了大家的良好口碑,。

Hyclone胎牛血清使用方法

 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，經(jīng)常加入5%-20%的Hyclone胎牛血清澳洲,，常使用的Hyclone澳洲胎牛血清濃度是10%,。高濃度的血清可能改變細(xì)胞的基因表達(dá)譜，影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果,，我們在實(shí)驗(yàn)中使用10%的Hyclone澳洲胎牛血清培養(yǎng)293T細(xì)胞,，效果非常好。但是有些細(xì)胞也會(huì)使用5%的Hyclone FBS或者20%的Hyclone胎牛血清,，要根據(jù)具體細(xì)胞選擇合適的胎牛血清濃度,。

Hyclone胎牛血清保存方法

1、需要長期保存的血清必須儲(chǔ)存于-20℃ - 70℃ 低溫冰箱中,。4℃冰箱中保存時(shí)間切勿超過1個(gè)月,。切勿將血清在37℃放置太久,否則血清會(huì)變得渾濁,同時(shí)血清中的有效成分會(huì)被破壞，而影響血清質(zhì)量,。如果一次無法用完一瓶,可將40～45ml分裝于無菌50ml離心管中,。由于血清結(jié)冰時(shí)體積會(huì)增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前，必須預(yù)留一定體積空間,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂,。

2,、一般廠商提供的血清為無菌,無需再過濾除菌。如發(fā)現(xiàn)Hyclone牛血清有懸浮物,則可將Hyclone牛血清加入培養(yǎng)液內(nèi)一起過濾,切勿直接過濾Hyclone牛血清,。

3,、瓶裝Hyclone胎牛血清解凍需采用逐步解凍法:-20℃ 至 -70℃ 低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室溫,待全部溶解后再分裝,一般以50ml無菌離心管可分裝40～45ml。在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沈淀的發(fā)生,。.切勿直接將血清從-20℃進(jìn)入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝集而出現(xiàn)沉淀,。

4、熱滅活是指56℃, 30分鐘加熱已*解凍的血清.加熱過程中須規(guī)則搖晃均勻.此熱處理的目的是使血清中的補(bǔ)體成分滅活.除非必須,一般不建議作此熱處理,因?yàn)闊崽幚頃?huì)造成血清沉淀物顯著增多,而且還會(huì)影響血清的質(zhì)量.補(bǔ)體參與反應(yīng)有:細(xì)胞毒作用, 平滑肌細(xì)胞收縮, 肥大細(xì)胞和血小板釋放組胺, 增強(qiáng)吞噬作用, 促進(jìn)淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞發(fā)生化學(xué)趨化和活化,。

5,、血清（例如：Hyclone南美血清）中的沉淀物絮狀物:主要是Hyclone牛血清中的脂蛋白變性及解凍后Hyclone牛血清中纖維蛋白造成,這些絮狀物不會(huì)影響血清本身的質(zhì)量.可用離心3000rpm,5分鐘去除,也可不用處理。 顯微鏡下"小黑點(diǎn)":經(jīng)過熱處理過的血清,沉淀物的形成會(huì)顯著增多,。有些沉淀物在顯微鏡下觀察象"小黑點(diǎn)",常誤認(rèn)為血清受污染,。一般情況下,此小黑點(diǎn)不會(huì)影響細(xì)胞生長,但如果懷疑血清（例如：Hyclone南美血清）質(zhì)量,則應(yīng)立即停止使用,更換另一批號(hào)的血清。

Hyclone胎牛血清使用中遇到的常見問題總結(jié)

一,、HyClone胎牛血清滅活問題,。

1、問：加到培養(yǎng)基中的HyClone胎牛血清必須滅活嗎,？

答：不是必須的,，看做什么實(shí)驗(yàn)了,。

2、問：Hyclone胎牛血清滅活是56℃ 30分鐘嗎,？

答：如果用于培養(yǎng)大多數(shù)的腫瘤細(xì)胞,，血清一般是不需要滅活的，這樣可以有效保存血清中的生長因子,。但是如果用于培養(yǎng)一些表面具有補(bǔ)體受體的細(xì)胞,，如內(nèi)皮細(xì)胞，血清是需要滅活,，一般是56℃,，30min。

3,、問：我要做滋養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng),，Hyclone血清要滅活嗎？

答：進(jìn)口的一般都已滅活,，國產(chǎn)的不一定,，還是滅活一下再用較安全。

4,、問：我用病毒上清轉(zhuǎn)染細(xì)胞,，培養(yǎng)用的Hyclone牛血清需要滅活嗎？因?yàn)檠逯锌赡苡行┭a(bǔ)體和抗體,，是不是會(huì)影響轉(zhuǎn)染,？我想未滅活的血清中含些抗體補(bǔ)體可能會(huì)和病毒相結(jié)合，影響轉(zhuǎn)染,，正確嗎,？細(xì)胞是單核細(xì)胞白血病細(xì)胞，病毒是病毒包裝細(xì)胞PT67收集的病毒上清,。為什么要用無血清培養(yǎng)基加病毒孵育幾小時(shí),，目的是什么？

答：血清一定要滅活,，可以先用無血清培養(yǎng)基加病毒孵育幾小時(shí)以后再加血清,。避免雜蛋白對(duì)病毒和宿主結(jié)合過程的干擾，一般是2-6小時(shí),，根據(jù)細(xì)胞的狀態(tài)決定,。血清不一定需要滅活，滅活的目的是將血清中的補(bǔ)體滅活,！這要根據(jù)實(shí)際情況而定,，如果沒有把握那就滅活吧，也不麻煩56度半個(gè)小時(shí),。

5,、問：(1)我買的是Hyclone胎牛血清澳洲,，要滅活嗎？有些說法是需要,，有些說直接解凍后就可以加入到培養(yǎng)基中,；我配制胰蛋白酶液，用的是D-PBS,，有關(guān)系嗎,？

答：關(guān)于血清的熱滅活，是很多人感興趣也存在一定爭議的話題,。大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室將血清的熱滅活還是作為常規(guī)來執(zhí)行，因?yàn)橛袃蓚€(gè)作用,，一是滅活補(bǔ)體,，第二是滅活血清中可能存在的支原體。但是實(shí)驗(yàn)者并沒有考慮熱處理對(duì)血清中的生長因子,、氨基酸等成分帶來的負(fù)面影響,。

我在實(shí)驗(yàn)室處理Hyclone南美血清的時(shí)候，有一次水浴箱在滅活過程中出現(xiàn)故障,，溫度升高到80℃,，血清變成了凝膠狀，我重新處理了另外一份血清,，將兩份血清對(duì)比,，發(fā)現(xiàn)高溫直接影響到血清所含的抗體蛋白。在56℃下滅活半小時(shí)以上,，肯定也會(huì)對(duì)里面的蛋白起到破壞作用,。下次有機(jī)會(huì)我做個(gè)延長滅活時(shí)間的實(shí)驗(yàn)試試，看看到底有多大的影響,。熱滅活之后,，血清放在四度冰箱久了，就會(huì)有沉淀產(chǎn)生,，這常常會(huì)被認(rèn)為是微生物污染或者是黑膠蟲污染,。為了驗(yàn)證到底有沒有污染，常常又會(huì)把血清放置37℃溫育,，但是血清中的蛋白會(huì)進(jìn)一步析出,，后還是要做鏡檢，無菌培養(yǎng)試驗(yàn),，和革蘭氏染色試驗(yàn),，非常麻煩。

我看過一份資料,，里面提到70%的實(shí)驗(yàn)者認(rèn)為滅活是理所當(dāng)然的,。常規(guī)滅活建議的溫度在45℃到62℃之間,，而時(shí)間則從15分鐘到60分鐘不等。其中常用的手法是56℃熱處理30分鐘,。隨著血清采集,、處理、加工工藝的提高,，許多早先認(rèn)為是熱滅活的原因已經(jīng)不再成立,，只有少數(shù)對(duì)血清進(jìn)行熱滅活的研究者在實(shí)驗(yàn)中證實(shí)了這一步驟的有效性和必要性。有人比較過11個(gè)不同細(xì)胞株,，發(fā)現(xiàn)其中熱滅活對(duì)6 個(gè)細(xì)胞株(HBAE,，MDBK，Vero,，成纖維細(xì)胞,，MRC-5)的生長帶來負(fù)面影響，三個(gè)細(xì)胞株(FOX-NY,，MDCK和CHO-K1)不受熱滅活的影響,，而只有兩個(gè)細(xì)胞株(Balb/3T3，Sp2/0Ag14 hybrid),，在熱滅活之后,，細(xì)胞生長有輕微的改善。所以,，在正常的操作下,，熱滅活通常對(duì)細(xì)胞的生長沒有明顯的促進(jìn)作用。

你可以摸索一下,，Hyclone澳洲SH30084.03血清從-20℃冰箱拿出來之后在常溫解凍,，然后混勻分裝成兩份，一份滅活,，一份不滅活,，比較這兩種血清對(duì)細(xì)胞是否有影響。然后再確定是滅活還是不滅活,。這個(gè)過程多也就一個(gè)星期,。同時(shí)你還要考慮血清滅活與否對(duì)你后續(xù)的實(shí)驗(yàn)有沒有影響。

問：(2)分裝后的HyClone胎牛血清澳洲從-20℃取出放4℃讓其液化,，卻見血清比較混濁,，有沉淀產(chǎn)生，這屬正常嗎,？

答：正常,。

二、血清的保存問題,。

1,、問：2016年6月到期的Hyclone北美胎牛血清到2017年5月還能用嗎,？

答：只有試試了，如果一直在-20℃凍著來者,，應(yīng)該還可以,，先少用點(diǎn)看看。養(yǎng)細(xì)胞系應(yīng)該沒問題,，原代不行,。

2、問：請(qǐng)問我自然溶化好的Hyclone北美血清和1640培養(yǎng)基今天用不上,，明天用,，我不想放到冰箱里，放在室溫下一晚行嗎,？100毫升培養(yǎng)瓶加多少培養(yǎng)基呢,？

答：可以放4℃。4-5ml,。

3、問：4℃冰箱內(nèi)保存3個(gè)月的HyClone胎牛血清(南美),，能否繼續(xù)使用,？相關(guān)細(xì)胞和其它試劑的代價(jià)比較高，不敢輕易嘗試,。

答：需要長期保存的Hyclone胎牛血清澳洲必須要保存在-20至-70℃的低溫冰箱中,，4℃冰箱中保存時(shí)間不要超過1個(gè)月。

三,、Hyclone澳洲血清滅活時(shí)溫度問題,。

1、問：因?yàn)閷?shí)驗(yàn)室水浴鍋失控,，Hyclone澳洲血清SH30084.03滅活時(shí),，溫度到了61.7℃，這血清還能用嗎,？

答：多長時(shí)間?。慷虝r(shí)間應(yīng)該可以吧,，我有一次加熱了一個(gè)多小時(shí),，還照樣用。

2,、問：我滅活Hyclone胎牛血清時(shí),，用的電磁爐，定在了70℃,，本來說調(diào)溫度到56℃再放血清的,，后來忘了,，就把血清放進(jìn)去了，所以滅活的溫度肯定超過56℃了,，不知道這樣對(duì)血清有沒有影響,？

答：常規(guī)滅活建議的溫度在45℃到62℃之間，而時(shí)間則從15分鐘到60分鐘不等,，其中常用的手法是56℃熱處理30分鐘,。看看你養(yǎng)的細(xì)胞是什么,，一般的話估計(jì)問題不大,，要是很珍貴的細(xì)胞還是慎重一點(diǎn)啊。熱滅活目的是為了去除血清中補(bǔ)體等對(duì)熱敏感的物質(zhì),， 在對(duì)補(bǔ)體滅活以外,，熱處理同時(shí)也對(duì)血清中可能存在的支原體具有滅活作用。現(xiàn)在好像不主張熱滅活,，熱滅活經(jīng)常給血清產(chǎn)品帶來負(fù)面影響,，對(duì)血清的加熱經(jīng)常導(dǎo)致血清中沉淀的產(chǎn)生，此外,，有研究結(jié)果證實(shí)熱滅活步驟減弱了胎牛血清（例如Hyclone北美血清SH30071.03）和小牛血清對(duì)細(xì)胞的促粘附作用,。

四、FBS可否代替人AB型血清,？

問：我現(xiàn)在在做人的外周血b淋巴細(xì)胞的培養(yǎng),，文獻(xiàn)上要求用人的AB型血清，但是我覺得很多代理商都沒有,。我想FBS代替,，但不知道可否，我先是擔(dān)心免疫排斥之類,，但是我查了些資料后,，應(yīng)該不會(huì)(我覺得)。但是我又不能夠TRY,。因?yàn)榧?xì)胞因子確實(shí)太貴了,，所以咨詢一下。謝謝,！

答：你照文獻(xiàn)的做,。除非你系列實(shí)驗(yàn)證明你用代用品的結(jié)果與文獻(xiàn)的相同(你還是要用到文獻(xiàn)的試劑)。細(xì)胞培養(yǎng)的影響因素很多,，特別是培養(yǎng)基的成分,。

五、血清的制備方法問題。

1,、問：我的實(shí)驗(yàn)需要自己制備一些血清用于培養(yǎng)細(xì)胞,，有沒有人知道用于培養(yǎng)細(xì)胞的血清需要怎樣的制備過程？

答：自己制備血清當(dāng)心污染啊,，直接購買Hyclone血清（Hyclone牛血清）,，例如Hyclone澳洲血清SH30084.03，效果好,，質(zhì)量穩(wěn)定,！如果無菌條件好的話，用靜置析出方法就行,。

2,、問：一般我們用得Hyclone胎牛血清用前還要滅活，我想用大鼠的血清,，不知道要不要滅活,？

答：你直接把采來的血液在離心管里4℃過夜，離心,，取上清,，在無菌過濾，也可滅活,，然后分裝凍存,，用時(shí)再配。

3,、問：如果滅活會(huì)不會(huì)對(duì)Hyclone血清中的一些因子有損傷？

答：加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng),。激活的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件,，刺激平滑肌收縮，細(xì)胞和血小板釋放組胺,，激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞,。在進(jìn)行免疫學(xué)研究、培養(yǎng)ES細(xì)胞,、昆蟲細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時(shí),，推薦使用熱滅活血清。滅活一般不會(huì)對(duì)血清中的一些因子損傷的,。

六,、心肌細(xì)胞原代培養(yǎng)時(shí)HyClone胎牛血清的使用問題。

1,、問：在進(jìn)行心肌細(xì)胞原代培養(yǎng)時(shí),，需要用含血清的培養(yǎng)基中止胰酶的消化作用，我現(xiàn)在使用的是含血清10%的培養(yǎng)液，但近日看北醫(yī)一個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)的課件發(fā)現(xiàn),，有用1%血清培養(yǎng)液進(jìn)行中止消化的,，想問一下，1%的是否可以,，效果是否有保證,？這樣確實(shí)能節(jié)省不少血清的。

答：關(guān)于心肌細(xì)胞元代培養(yǎng)的FBS問題：

(1)1%的Hyclone血清*培養(yǎng)基可不可以,，得看你胰酶的用量,。但是在心肌細(xì)胞元代培養(yǎng)就不行。 10%的FBS*培養(yǎng)基效果都不太好,，開始心肌細(xì)胞元代培養(yǎng)需要高濃度的FBS,，20%左右，但這就有出現(xiàn)另一個(gè)問題,，在FBS*培養(yǎng)基中,，成纖維細(xì)胞呈優(yōu)勢細(xì)胞，須得在培養(yǎng)基加入適量的BrdU以抑制其生長,，純化心肌細(xì)胞,。

(2)FBS的作用不僅僅是拿來中和胰酶，只是FBS中的一些蛋白質(zhì)如α-巨球蛋白等有抑制胰酶活性作用,。

(3)元代心肌細(xì)胞培養(yǎng)的FBS使用,，有講究：剛開始使用20%左右的高濃度的FBS，后逐漸遞減為無血清的DMEM/F-12培養(yǎng)基培養(yǎng),。

2,、問：我胰酶的用量是0.08% ，并混和了0.08%的膠原酶,。FBS要高濃度遞減是否是說的在細(xì)胞培養(yǎng)中啊,，難道在消化時(shí)終止也需要如此高的濃度嗎，還有,，我的BRDU只用到48小時(shí)就不用了,，因?yàn)閾?dān)心其損傷太大，可以持續(xù)用多久呢,？

答：我用10%FBS終止的,，然后差速1h，然后還是用10%FBS的HG-dmem養(yǎng)的,，沒有用brdu,，心肌細(xì)胞還是比較多和穩(wěn)定的，我第3天就可以用,，第2天晚上看就會(huì)有搏動(dòng),。

七,、血清和培養(yǎng)基的種類及品牌問題。

1,、問：細(xì)胞培養(yǎng)的Hyclone胎牛血清用哪個(gè)公司的產(chǎn)品比較好呢,？周圍有人用PAA或HyClone胎牛血清，這兩種跟Gibco或sigma出品的差別大嗎,？

答：如果是長得非?？斓眉?xì)胞如pa317，293,，c6等惡性腫瘤細(xì)胞,，一般得國產(chǎn)血清就可以，如果是原代培養(yǎng)的細(xì)胞,，應(yīng)用胎牛血清或類標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,，Hyclone公司血清的質(zhì)量不如Gibco(同類血清)。國產(chǎn)的杭州四季青和甘肅民海（中美和資）不錯(cuò),。有些細(xì)胞(如：sf9,，293還有其他一些元代細(xì)胞)，用Hyclone的比其他兩種好很多,，會(huì)大大加速試驗(yàn)進(jìn)度,。對(duì)于其他一些細(xì)胞(如：vero，MDCK,，pk)四季青,，Hyclone的小牛血清足矣！另外,，Hyclone的還要看產(chǎn)地,，常用的Hyclone胎牛血清有Hyclone南美胎牛血清SV30087.02、Hyclone北美胎牛血清SH30071.03,、Hyclone澳洲胎牛血清SH30084.03,。

2、問：近公司要訂一瓶Hyclone胎牛血清澳洲,，實(shí)驗(yàn)室之前都在用小牛血清,，沒有買過胎牛血清,。請(qǐng)問哪個(gè)進(jìn)口公司的好一些,？問過試劑公司和進(jìn)口公司，有兩種：一種是PAA的(分普通級(jí)和優(yōu)級(jí)),，一種是Hyclone的(只有普通級(jí),，而且是新西蘭產(chǎn)的)。試劑公司推薦使用PAA優(yōu)級(jí)的,，但看好多文獻(xiàn)都用Hyclone的,，公司說是因?yàn)楝F(xiàn)在Hyclone的都不是美國進(jìn)口的了。請(qǐng)問用的哪種胎牛血清比較好？

答：民海的效果還不錯(cuò),，要是不放心國產(chǎn)的,，那就買進(jìn)口的。進(jìn)口的好多公司都有,，新西蘭產(chǎn)的效果一般,。Hyclone和Hyclone的都還可以。民海的似乎比四季青的要好些,。復(fù)蒙的感覺也不錯(cuò),。

3、問：四季青“無噬菌體,、低內(nèi)毒素胎牛血清”與“無支原體胎牛血清”的區(qū)別,？培養(yǎng)腫瘤傳代細(xì)胞用哪一個(gè)比較好些？

答：用無支原體胎牛血清就可以啦,。

4,、問：SKBR-3細(xì)胞培養(yǎng)用哪種型號(hào)的1640培養(yǎng)基及胎牛血清？

答：我一直用Hyclone的1640,，你可以買含HEPES的1*10L的包裝,，胎牛血清也是用的Hyclone，10%就行,。

八,、Hyclone牛血清污染噬菌體的問題。

1,、問：有誰知道小牛血清制造過程中怎樣能夠避免噬菌體的污染,，以及對(duì)已污染噬菌體的牛血清怎樣能夠除去噬菌體？

2,、問：我也想知道,，我用的血清中大部分都有噬菌體，它對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)到底有什么影響,？

答：不知道您使用的是什么胎牛血清,，我們使用的Hyclone胎牛血清，具體是Hyclone澳洲血清SH30084.03,，質(zhì)量還算比較穩(wěn)定,，不含有噬菌體。

九,、培養(yǎng)基HyClone胎牛血清濃度問題,。

問：在1640里加Hyclone血清時(shí)加多了，90ml里加了20ml Hyclone澳洲血清SH30084.03,，約為18%,，以前都是加10ml的,，查了網(wǎng)上多建議用10%-15%，有關(guān)系嗎,？

答：我認(rèn)為一般來說Hyclone牛血清濃度的較大波動(dòng)對(duì)細(xì)胞的狀態(tài)影響較大,，建議再加90ml1640調(diào)成10%。血清濃度大當(dāng)然細(xì)胞狀態(tài)感覺要好,，但是高濃度的血清可能改變細(xì)胞的基因表達(dá)譜,，影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。10%的濃度培養(yǎng)鼻煙癌細(xì)胞很好,。

十,、問：MTT加藥的時(shí)候加不加血清？加藥時(shí)要用無血清的培養(yǎng)基嗎,？

答：我的藥就是用含Hyclone牛血清的培養(yǎng)基稀釋的,，不含血清的培養(yǎng)基對(duì)細(xì)胞有毒性或抑制作用，無形中對(duì)細(xì)胞造了一個(gè)serum-free的模型,，細(xì)胞在提內(nèi)本來就是有血清供應(yīng),，如果該藥物都不能對(duì)抗，那該藥物就沒有什么臨床價(jià)值了,，這是我的理解,。

十一、PC12細(xì)胞培養(yǎng)所用血清問題,。

問：我正準(zhǔn)備購買上海細(xì)胞所的未分化的PC12細(xì)胞,，需要滅活的馬血清，可現(xiàn)在買血清很困難,，好像是海關(guān)有封鎖,，代理商這么說的，我原定購買的Hyclone的horse surum,，現(xiàn)在無法買到了,，好容易找到一個(gè)目前可以進(jìn)血清的公司Hyclone，有一種Donor Equine serum是馬血清嗎,？

答：Hyclone的Donor Equine serum可以用,，我以前用的就是這個(gè)。我當(dāng)時(shí)買的,，100ml大概140元,，具體不記得了。當(dāng)時(shí)是看它比別的進(jìn)口的馬血清便宜,。另外：我買了以后滅活的,。

十二,、AB血清的制備問題,。

問：本人想從人的外周血中分離AB血清的,，用于B淋巴細(xì)胞的培養(yǎng)。謝謝大家給點(diǎn)建議,。人的血,，來之不易啊。

答：是AB血型人的血清嗎,？這種血清即沒有抗A型抗原抗體,，也沒有抗B型抗原抗體。分離血清時(shí)將采集的血液注入試管中,，待血液凝固后離心分離血清,。可將采集的血液放在37℃水浴箱中促進(jìn)血液凝固,，減少凝固時(shí)間,。離心可在2500～3000rpm，10min,，足可以分離血清,。分離后將血清吸出保存即可。分離血清的量可按采集血液的50%左右計(jì)算,，因?yàn)榧t細(xì)胞占總血液的50%左右,。當(dāng)然整個(gè)過程要注意無菌操作。

十三,、HyClone胎牛血清內(nèi)是否含糖,？

問：我想做糖誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的試驗(yàn)。細(xì)胞培養(yǎng)液里加入了20%的胎牛血清,。因此胎牛血清里是否含有糖對(duì)我實(shí)驗(yàn)的培養(yǎng)液糖終濃度影響比較大,。今天打電話問Hyclone公司的技術(shù)顧問，回答我糖濃度少于5μg/ml,，因此基本可認(rèn)為是不含糖,。但我今天把胎牛血清送到我們醫(yī)院檢液科，結(jié)果卻是：6.2mmmol/l(葡萄糖氧化酶法),。難道是檢測人血清的血糖濃度的方法不能用于檢查牛血清嗎,？(另起茶水驗(yàn)?zāi)蚴录?檢驗(yàn)科沒有給我回答。

答：應(yīng)該是不含糖的,。

十四,、血清或培養(yǎng)基產(chǎn)生了顏色或沉淀的問題：

1、問：我用的是?？寺√ヅＱ?，56℃30分鐘滅活后出現(xiàn)了白色少量絮狀沉淀，是不是污染,？還能不能再用,？血清的生產(chǎn)日期是2006年7月(現(xiàn)在是2007年6月11日),。

答：應(yīng)該問題不大。你可以取少量Hyclone血清放入培養(yǎng)皿中,，37℃過夜培養(yǎng)看看就知道是否污染了,。血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因，但普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成,，而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血渭解凍后,，也會(huì)存在于血清中，亦是造成沉淀物的主要原因之一,。但這些絮狀沉淀物,，并不影響血清本身的質(zhì)量。若您欲去除這些絮狀沉淀物,，可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi),，以400g稍微離心，上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾,。

2,、問：我用MTT法測細(xì)胞的增殖，用DMSO裂解細(xì)胞,，發(fā)現(xiàn)把DMSO加入到孔中就會(huì)形成乳白色(用的含胎牛血清的1640培養(yǎng)基,，由于沒有離板子的離心機(jī)，所以沒有去除培養(yǎng)基直接加的DMSO),。以前用含小牛血清的培養(yǎng)基沒有看到有這種情況,。該怎么解決？

答：為什么要用離心機(jī)離心呢,？難倒你養(yǎng)的是懸浮細(xì)胞嗎,？如果是貼壁細(xì)胞的話直接將MTT倒掉，再加DMSO即可,，我們就是這么做的,，效果很好！并且測細(xì)胞的增殖的話如果不去掉MTT就加DMSO的話誤差應(yīng)該很大,！有時(shí)不一定就是血清的原因,，可能跟你的MTT放置的時(shí)間或以及其他成分有關(guān)！

3,、問：(1)Hyclone胎牛血清500ml,，今天解凍后沒有混勻直接分裝，結(jié)果使得前面的幾管是清亮的,，后面就帶有棕色的,，不知有沒有影響？估計(jì)有什么影響？前面的成分好還是棕色的成分好??？

答：肯定有。還是重新混合重新分裝,，我覺得有效成分會(huì)集中在棕顏色部分。

問：(2)為什么會(huì)出現(xiàn)棕色呢,？

答：血清中的棕色多一些可能是因?yàn)榧t蛋白的含量高些的緣故吧,。

問：(3)Hyclone血清滅活之后可以存放嗎？我的是前天滅活的,，但是沒有加到培養(yǎng)基里,，而是放在冰箱里，那下次可以直接用嗎,？還是再次滅活?。?/span>

答：當(dāng)然可以,，如果多的話,，分裝后放在－20℃，下次用時(shí)再解凍,，也不用再滅活,。用一管拿一管，少許血清可以放在4℃,。分裝時(shí)還要注意不要裝得太滿,，以免溢出污染。

十五,、污染和過濾的問題,。

1、問：懷疑使用中的Hyclone胎牛血清染菌,，想用濾膜過濾一下,，可否自己用0.22μm濾膜過濾？對(duì)血清性質(zhì)有多大影響,？有做過的么,？

答：可以過濾的，Hyclone血清當(dāng)出廠時(shí)都是0.22μm或0.1μm過濾除菌,。想證明有沒有染菌不用過濾這么麻煩,，只要放置于37℃過夜就可以了，如果有微生物污染會(huì)變渾濁的,，如果還是澄清的就說明沒有問題的,。實(shí)驗(yàn)室中血清很難直接過濾，一般要加到培養(yǎng)基中再過濾,。我們實(shí)驗(yàn)室制備培養(yǎng)基時(shí),，都使用濾膜過濾,，一般而言如果制備1-2瓶培養(yǎng)基，一個(gè)濾膜及一支30ml注射器可以過濾50ml小牛血清,。如果大量制備培養(yǎng)基也可以將血清加到培養(yǎng)基中,，使用0.22微米的大濾膜一起過濾。

2,、問：我懷疑我用的*1640培養(yǎng)液被污染了,，準(zhǔn)備重新過濾消毒，過濾后是否需要補(bǔ)充胎牛血清,？如需又如何補(bǔ)充,？

答：*1640培養(yǎng)液被污染了，如果是支原體的話,，過濾沒有作用,，支原體可以通過濾膜。我們用1640液,，都是配液后保留500ml,，然后其他的分裝100-200ml，現(xiàn)用現(xiàn)配因?yàn)檠灞?640要貴,，如果你想過濾的話,，建議你加原比例血清，因?yàn)檠宀粫?huì)很容易通過濾膜,。主要的還是找到可能污染的原因,。

3、問：加好了血清雙抗的培養(yǎng)基由于污染了再過濾后還能用嗎,？

答：建議不要用了,。在加了雙抗的情況下已經(jīng)污染，那么細(xì)菌污染的可能性會(huì)較小了,。一般的過濾除不能去除病毒或者部分真菌的污染的,。

4、問：我準(zhǔn)備把使用的*1640培養(yǎng)液重新過濾一遍,，不知道培養(yǎng)液中的血清成分是否能通過濾膜,，過濾后是否還需要補(bǔ)充胎牛血清？如需又如何補(bǔ)充,？

答：可以透過,，但是隨著液體量的增多會(huì)很慢，如果不加壓會(huì)比較麻煩,，還有用低蛋白吸附的,，不然損失是比較大的。

十六、問：懸浮細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)能否加Hyclone澳洲血清SH30084.03,？如果加了會(huì)有什么結(jié)果,？為什么懸浮細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)就不能加血清？

答：血清是細(xì)胞培養(yǎng)基中重要的培養(yǎng)成份之一,，對(duì)細(xì)胞生長有廣泛影響,。在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，我們通常會(huì)加入10%的Hyclone胎牛血清,。血清的質(zhì)量對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)的成功至關(guān)重要,。一般說來，牛血清包括以下成分：生長因子(如激素,，白細(xì)胞介素等),，他們可以促進(jìn)細(xì)胞生長,；貼附因子,，他們可以促進(jìn)細(xì)胞的貼壁，往往只有細(xì)胞貼壁才能增值(懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞除外),；蛋白質(zhì)(如血清白蛋白,，球蛋白等)，既可以作為營養(yǎng)物質(zhì),，又可以中止胰酶的作用,；還有很多成分不明的物質(zhì)。血清還可以起到解毒作用,，如脂肪酸,、重金屬和某些蛋白酶的毒性。血清還可以是細(xì)胞免受機(jī)械損傷,。因此,，無論是貼壁細(xì)胞還是懸浮細(xì)胞，血清是*的,。除非因?qū)嶒?yàn)要求無血清培養(yǎng)時(shí),，例如：為使細(xì)胞同步化時(shí)，我們會(huì)采用無血清培養(yǎng)的,。單純的說懸浮細(xì)胞培養(yǎng)不能加Hyclone血清就沒有太多的道理了,。

十七、關(guān)于中和消化液需要的血清量,。

問：用胰蛋白酶消化細(xì)胞后,，需要用血清中和。具體這種中和作用所要求的胰蛋白酶和血清之間的比例是多少,？

答：做了很久的試驗(yàn),，真的沒有想過胰酶和血清的對(duì)應(yīng)關(guān)系。不過細(xì)想下來，這個(gè)應(yīng)該也沒有固定的比值,。血清的品種都是不同的,，成分必然有差異，如何能確定其與胰酶的比值關(guān)系,？我們消化細(xì)胞的時(shí)候,，如果是傳代，細(xì)胞變形后,，吸出胰酶直接加入適量的hanks液或者全培,，這個(gè)量看自己的喜好和吹打細(xì)胞方便而定。一般都可以中止消化的,。不會(huì)存在繼續(xù)消化的事情,。如果是從組織上消化細(xì)胞做原代培養(yǎng)，我一般都使用全培進(jìn)行中止,，而且加的很多,，0.25%的胰酶，用10%血清,，按1:2的比例應(yīng)該是足夠的,。當(dāng)然全培是2，一般我養(yǎng)細(xì)胞的時(shí)候,，會(huì)用國產(chǎn)的比較便宜的血清配制全培,，專門用于中止消化，這樣有幾個(gè)好處：一是中止消化的效果應(yīng)該好于hanks液吧,，再是也有利于維持細(xì)胞活性,。而且這部分液體會(huì)被離心去掉，血清便宜,，離心掉了不會(huì)心疼,。而養(yǎng)細(xì)胞的時(shí)候用好血清。個(gè)人觀點(diǎn),，僅供參考,。

十八、HyClone胎牛血清澳洲中的懸浮物問題,。

1,、問：發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)的細(xì)胞瓶中背景有許多的小黑點(diǎn)，培養(yǎng)液中也有一些漂浮的物,?？戳酥暗奶詾槭悄z原蟲。本打算換液,，換液前特意看了下前些天配的培養(yǎng)液,，肉眼發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液中有懸浮的顆粒狀物質(zhì)(不多),，于是放在鏡下觀察，新鮮培養(yǎng)液中有一些懸浮的小顆粒,，不多,。(培養(yǎng)液是R1640+20%牛血清+1%雙抗)于是又將分裝在4℃保存的小牛血清拿出觀察，肉眼可見5,、6個(gè)白色小小球狀的物質(zhì),，在血清瓶稍靠下的部位懸浮。鏡下觀察,，也有少量的不知什么物質(zhì)的東西漂浮,。小牛血清是Hyclone新西蘭的，標(biāo)簽上寫已經(jīng)經(jīng)過2μm濾膜過濾處理,。根據(jù)上述培養(yǎng)液的情況,，是否說明培養(yǎng)液已被污染？如果是正常的血清是不是在鏡下不應(yīng)該看到雜物,，哪怕是極少量的,？根據(jù)上述血清的描述，是不是說明血清也存在問題,，還能用嗎,？補(bǔ)充：細(xì)胞培養(yǎng)以來生長狀態(tài)就不好,。買血清的時(shí)候廠家說明不用滅活,，所以未滅活。

答：(1)血清應(yīng)該-20℃保存,，解凍血清時(shí),，請(qǐng)按照的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫)，若血清解凍時(shí)改變的溫度太大實(shí)驗(yàn)顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物,。

(2)血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因,，但普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成，而血纖維蛋白在血清解凍后,，也會(huì)存在于血清中,，亦可造成沉淀物。

(3)若您一次無法用完一瓶,，建議您無菌分裝血清,，再放回冷凍，若存放于4℃時(shí),，請(qǐng)勿超過一個(gè)月,，儲(chǔ)存在2－8℃時(shí)，血清中的各種蛋白和脂蛋白,，可能聚集而形成沉淀或可見的混濁,。

(4)解凍HyClone胎牛血清時(shí),，請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻，使溫度及成分均一,，減少沉淀的發(fā)生,。

(5)排出了血清的原因，在考慮實(shí)驗(yàn)用品和無菌操作的問題,。

(6)細(xì)菌病毒,、衣原體、黑膠蟲污染也很常見,，如果細(xì)胞死的太多,，影響較大建議更換培養(yǎng)液。

2,、問：今天在配培養(yǎng)液時(shí),，發(fā)現(xiàn)HyClone胎牛血清北美里面有小碎片樣的漂浮物，血清仍然清亮,，不渾濁,。不知道是什么，問了實(shí)驗(yàn)室的學(xué)長,，說仍然可以用,，但還是不放心，沒有用血清,。求助園子的各位達(dá)人,，這可能是血清出了什么問題？我的血清用了一個(gè)月不到,，四季青的,。

答：可能的原因：(1)培養(yǎng)液配置時(shí)Votex不夠，當(dāng)時(shí)是清亮的,，但過一段時(shí)間會(huì)析出來,；(2)真菌污染。

十九,、更換無血清培養(yǎng)基后細(xì)胞大量死亡的問題,。

問：我使用Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染成骨細(xì)胞，在轉(zhuǎn)染前要換上無血清的培養(yǎng)基,。本來?xiàng)l件模的好好的,，轉(zhuǎn)染效率也可以接受。但是寒假一回來就發(fā)生了怪事：細(xì)胞在有血清的培養(yǎng)基中長的好好的,，一換無血清的培養(yǎng)基就死亡,。大概4個(gè)小時(shí)就能看到較多的細(xì)胞飄起來。但是原來我換無血清培養(yǎng)基,，就算放那里10個(gè)小時(shí)都是沒問題的啊,。已經(jīng)換了不同批次的培養(yǎng)基,，甚至吸管什么的都換過了，但是就是不行,，是怎么回事,？

答：(1)兩周后的培養(yǎng)液應(yīng)補(bǔ)加谷氨酰胺，或者重新配液,，轉(zhuǎn)染時(shí)應(yīng)不含抗生素,。

(2)確認(rèn)操作方法和環(huán)境，建議檢查一下,。

(3)Lipofectamine2000,，脂質(zhì)體的毒性很大，如果有質(zhì)粒參與對(duì)細(xì)胞損傷更大,，如果Lipofectamine2000在常溫放置過,，對(duì)細(xì)胞更大，假期冰箱是否斷過電,。

(4)培養(yǎng)箱的溫度,、c02濃度，濕度,。

二十,、*培養(yǎng)液的相關(guān)定義。

問：“*培養(yǎng)液一詞”,，是指加了HyClone胎牛血清的培養(yǎng)液嗎,？我在做含藥血清的實(shí)驗(yàn)，涉及到血清添加量的問題,。所以想弄明白文中所指的“*培養(yǎng)液”是否是含藥血清,。

答：原液是指配置后過濾除菌,。不*培養(yǎng)液是指不含有血清的原液,，其他成分已補(bǔ)充。*培養(yǎng)液是指不*培養(yǎng)液加入血清后稱*培養(yǎng)液,。

二十一,、血清相關(guān)知識(shí)總結(jié)。

使用HyClone胎牛血清的注意事項(xiàng)：

血清是細(xì)胞培養(yǎng)中重要的元素之一,。下面是實(shí)驗(yàn)室里常會(huì)遇到的問題,，僅供大家參考：

1、保存血清的方法：

建議Hyclone北美血清SH30071.03應(yīng)保存在-5℃ 至 -2O ℃ ,。然而,，若存放于 4 ℃ 時(shí)，請(qǐng)勿超過一個(gè)月,。若您一次無法用完一瓶,，建議您無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi),，再放回冷凍。

2,、如何解凍HyClone胎牛血清才不會(huì)使產(chǎn)品質(zhì)量受損：

建議您將Hyclone胎牛血清北美從冷凍箱取出后,，先置于2～8℃ 冰箱使之溶解，然后在室溫下使之全溶,。但必須注意的是,，溶解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。

3,、HyClone胎牛血清南美解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn),，該如何處理：

血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因，但普的原因是由于Hyclone血清中脂蛋白的變性所造成,，而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血渭解凍后,，也會(huì)存在于血清中，亦是造成沉淀物的主要原因之一,。但這些絮狀沉淀物,，并不影響血清本身的質(zhì)量。

若您欲去除這些絮狀沉淀物,，可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi),，以400g稍微離心，上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾,。我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,，因?yàn)樗赡軙?huì)阻塞您的過濾膜。

4,、何謂熱滅活：

一般是以 56℃ ,， 30 分鐘來處理已解凍的血清，因?yàn)榇思訜岵襟E,，可以使補(bǔ)體去活化,，而補(bǔ)體所參與的反應(yīng)有 : 溶細(xì)胞活性，平滑肌的收縮,，肥大細(xì)胞和血小板組胺的釋放,，增強(qiáng)吞噬作用，淋巴細(xì)胞,、巨噬細(xì)胞的趨化和激活,。

5、關(guān)于HyClone胎牛血清的滅活：

有必要做熱滅活嗎,？

實(shí)驗(yàn)顯示,，經(jīng)過正確處理的熱滅活Hyclone北美血清SH30071.03，對(duì)大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的,。經(jīng)此處理過的Hyclone血清對(duì)細(xì)胞的生長只有微小的促進(jìn),，或*沒有任何作用,，甚至通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量，而造成細(xì)胞生長速率的降低,。而經(jīng)過熱處理的血清,，沉淀物的形成會(huì)顯著的增多，這些沉淀物在倒立顯微鏡下觀察,，像是“小黑點(diǎn)”,，常常會(huì)讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在 37℃ 環(huán)境中,，又會(huì)使此沉淀物更增多,，使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增。

因此我們建議您,，若非必須,，您可以不需要做熱處理這一步。如此一來,，不但節(jié)省您寶貴的時(shí)間,，更確保您血清的質(zhì)量！

6,、HyClone胎牛血清相關(guān)知識(shí)：

如何避免沉淀物的產(chǎn)生,？

我們建議您在使用血清的時(shí)候，注意下列的操作 :

(1)解凍Hyclone南美血清時(shí),，請(qǐng)按照所建議的逐步解凍法(-2O℃至4℃至室溫),，若血清解凍時(shí)改變的溫度太大(如-20℃至37℃)，實(shí)驗(yàn)顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物,。

(2)解凍?？寺√ヅＱ鍟r(shí)，請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻,，使溫度及成分均一,，減少沉淀的發(fā)生。

(3)請(qǐng)勿將血清置于37℃太久,。若在37℃放置太久,，血清會(huì)變得混濁，同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會(huì)因此受到損害,，而影響血清的質(zhì)量。

(4)HyClone胎牛血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,，若非必要,，可以無須做此步驟。

(5)若必須做HyClone胎牛血清的熱滅活,，請(qǐng)遵守56℃,，30 分鐘的原則,，并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過高,，時(shí)間過久或搖晃不均勻,，都會(huì)造成沉淀物的增多。