大鼠免疫球蛋白A(IgA)酶聯(lián)免疫檢測

                試劑盒使用說明書           AE90714Ra

    使用前仔細閱讀本說明書,。本酶聯(lián)免疫試劑盒是基于雙抗體夾心技術原理，來檢測大鼠免疫球蛋白A(IgA),，只能用于研究用途,，不得用于醫(yī)學診斷。

用  途：用于大鼠血清,、尿液及相關液體樣本中免疫球蛋白A(IgA)測定,。

工作原理：

本試劑盒采用的是生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定樣品中大鼠免疫球蛋白A(IgA)水平。向預先包被了大鼠免疫球蛋白A(IgA)單克隆抗體的酶標孔中加入大鼠免疫球蛋白A(IgA),，溫育,；溫育后，加入生物素標記的抗免疫球蛋白A(IgA)抗體,。再與鏈霉親和素-HRP結合,，形成免疫復合物，再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶,，然后加入底物A,、B，產生藍色,，并在酸的作用下轉化成終的黃色,。顏色的深淺與樣品中大鼠免疫球蛋白A(IgA)的濃度呈正相關。

試劑盒組成

需要而未提供的試劑和器材

1. 37℃恒溫箱,。
2. 標準規(guī)格酶標儀,。
3. 精密移液器及一次性吸頭
4. 蒸餾水，
5. 一次性試管
6. 吸水紙

注意事項

1. 從2-8℃取出的試劑盒,，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標包被板開封后如未用完,，板條應裝入密封袋中保存,。
2. 各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性,，以避免試驗誤差
3. 嚴格按照說明書的操作進行,，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
4. 為避免交叉污染，要避免重復使用手中的吸頭和封板膜,。
5. 不用的其它試劑應包裝好或蓋好,。不同批號的試劑不要混用。保質前使用,。
6. 底物B對光敏感,，避免長時間暴露于光下。

洗板方法

手工洗板方法：甩掉酶標板內的液體,；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,，酶標板朝下用力拍幾次；將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內,，浸泡1-2分鐘,。根據(jù)需要，重復此過程數(shù)次,。

自動洗板：如果有自動洗板機,，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中

標本要求

1．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。

2．標本采集后盡早進行提取,，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗,，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。

操作程序

1. 標準品的稀釋：(本試劑盒提供原倍標準品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋,。)

   120 μg/ml	5號標準品	120μl的原倍標準品加入120μl標準品稀釋液
   60 μg/ml	4號標準品	120μl的5號標準品加入120μl標準品稀釋液
   30 μg/ml	3號標準品	120μl的4號標準品加入120μl標準品稀釋液
   15 μg/ml	2號標準品	120μl的3號標準品加入120μl標準品稀釋液
   7.5 μg/ml	1號標準品	120μl的2號標準品加入120μl標準品稀釋液

2. 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔,。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,，能使用復孔的盡量做復孔。
3. 加樣：1）空白孔,，空白對照孔不加樣品,，生物素標記的抗IgA抗體，鏈霉親和素-HRP,，只加顯色劑A&B和終止液,，其余各步操作相同；2）標準品孔：加入標準品50ul,，鏈霉親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體,，故不加)；3）待測樣品孔：加入樣本40ul,，然后各加入抗IgA抗體10ul,、鏈霉親和素-HRP50ul，蓋上封板膜,，輕輕震蕩混勻,，37℃溫育60分鐘。
4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用,。
5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去，如此重復5次,，拍干,。
6. 顯色：每孔先加入顯色劑A50ul，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.
7. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）,。
8. 測定：以空白空調零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后10分鐘以內進行,。
9. 根據(jù)標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線回歸方程,，再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計算出對應的樣品濃度,。也可以使用各種應用軟件來計算。

操作程序總結：

試劑盒性能：

1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.92以上,。

2.批內與批間應分別小于9%和15%

檢測范圍：

檢測范圍：1.5μg/ml→120μg/ml.

保存條件及有效期：

保存：2-8℃,。

有效期：6個月(2-8℃)。