免疫組化SP法步驟

SP（streptavidin-perosidase）法,即鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(jié)法.
按標(biāo)記物質(zhì)的種類,，如熒光染料,、放射性同位素、酶（主要有辣根過氧化物酶和堿性磷酸酶）,、鐵蛋白,、膠體金等，可分為免疫熒光法,、放射免疫法,、酶標(biāo)法和免疫金銀法等。按染色步驟可分為直接法（又稱一步法）和間接法（二步,、三步或多步法）,；按結(jié)合方式可分為抗原—抗體結(jié)合，如過氧化物酶-抗過氧化物酶（PAP）法和親和連接,，如卵白素-生物素-過氧化物酶復(fù)合物（ABC）法,、鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(jié)（SP）法等，其中SP法是zui常使用的方法,。
一般的sp法步驟啊,具體如下：
1.烤片,，68℃，20分鐘,
2. 常規(guī)二甲苯脫蠟,，梯度酒精脫水,；二甲苯I 20min --二甲苯II 20 min--100%酒精I(xiàn) 10min --100%II 10min --95% 5min-- 80% 5min-- 70% 5min
3.阻斷 滅活內(nèi)源性過氧化物酶：3%H2O2 37℃孵育10min,，PBS沖洗3X5min；
4. 抗原修復(fù):置0.01M枸櫞酸緩沖液（PH 6.0）中用煮沸（95℃,，15－20min）,，自然冷卻20min 以上，再用冷水沖洗缸子,，加快冷卻至室溫,，PBS沖洗3X5min。
5. 正常羊血清工作液封閉,，37℃10 min,，傾去勿洗.
6. 滴加一抗4℃ 冰箱孵育過夜，PBS沖洗3X5min（用PBS緩沖液代替一抗作陰性對照）,；
滴加生物素標(biāo)記二抗, 37℃孵育30min, PBS沖洗3X5min;
7. 滴加辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉素卵白素工作液,，37℃孵育30min, PBS沖洗3X5min;
8. DAB/ H2O2反應(yīng)染色，自來水充分沖洗后,，
蘇木素復(fù)染,，常規(guī)脫水，透明,，干燥,，封片。