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木聚糖酶活性測定方法分享

時間:2024/8/23閱讀:386
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木聚糖是一種存在于植物細胞壁中的多糖類物質,,是植物半纖維素的主要成分,。
木聚糖酶分布廣泛,可以從動物,、植物及微生物體內獲得,。

檢測原理:
木聚糖酶可以將底物木聚糖降解為寡糖和單糖,具有還原性的寡糖和單糖在沸水浴的條件下,,能夠和DNS試劑發(fā)生顯色反應,。
通過反應溶液的顏色的變化,來確定還原糖的含量,。
因為還原糖的生成量和反應液的木聚糖活力是成正比的,,通過分光光度法可以測定,計算出樣品中的木聚糖酶活力,。

檢測所用的試劑:
乙酸溶液,、乙酸鈉溶液、氫氧化鈉溶液,、乙酸-乙酸鈉緩沖溶液,、木糖溶液,、木聚糖溶液、DNS試劑,。
所需要的儀器設備:
碾缽,、分樣篩,、分析天平,、pH計、磁力攪拌器,、電磁振蕩器,、離心機,、恒溫水浴鍋、分光光度計等,。

標準曲線:
吸取乙酸-乙酸鈉緩沖溶液4ml,,加入DNS試劑5ml,沸水浴加熱5min,,用自來水冷卻至室溫,,用水定容至25ml,制成標準空白樣,。
分別吸取木糖溶液1ml,、2ml、3ml,、4ml,、5ml、6ml,、7ml,,加入緩沖溶液定容至100ml,配制成0.1-0.7mg/ml的木糖標準溶液,。
按照上述的標準溶液配制,,分別做2次平行。吸取木糖標準溶液2ml,,分別加入2ml水和5mlDNS試劑。
電磁振蕩3s,,沸水加熱5min,,用自來水冷卻至室溫,用水定容至25ml,。
以標準空白樣作為對照,,在540nm處測吸光度OD值。
以木糖濃度為Y軸,,吸光度OD值為X軸,,繪制標準曲線,。

檢測過程:
吸取10ml木聚糖溶液,37℃平衡10min,。
吸取10ml經(jīng)過稀釋的木聚糖酶溶液,,37℃平衡10min。吸取2ml平衡過的木聚糖酶液,,加入5mlDNS試劑,,電磁振蕩3s。
加入2ml木聚糖溶液,,37℃保溫30min,。沸水浴加熱5min,用自來水冷卻至室溫,,加水定容至25ml,,電磁振蕩3s。
以標準空白樣為空白對照,,在540nm處測定吸光度,。以同樣的方法,加入2ml的木聚糖酶,,電磁振蕩3s,,37℃精確保溫30min,加入5mlDNS試劑,,電磁震蕩3s,,以終止酶解反應。
沸水浴加熱5min,,用自來水冷卻至室溫,,加水定容至25ml,振蕩3s,,以標準空白樣為空白對照,,在540nm處測定吸光度。

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