超濾離心管是一種采用優(yōu)化過(guò)濾結(jié)構(gòu)的設(shè)計(jì)方式,，減少濃差極化,，降低了膜易污染堵塞機(jī)率,，加快了離心速度,，縮短了離心所需的時(shí)間；超濾離心管還可用的膜表面面積提供快速樣品處理,。

超濾離心管具體用法：

(1)選擇合適的超濾管,。通常應(yīng)截留分子量不應(yīng)大于目的蛋白分子量的1/3，認(rèn)真閱讀使用說(shuō)明書(shū),，注意超濾膜對(duì)各種化學(xué)物質(zhì)的耐受程度有所不同,。

(2)新買來(lái)的超濾是干燥的,，使用前加入超純水,，水量過(guò)膜,，冰浴或冰箱里預(yù)冷幾分鐘。然后將水倒出,，即可加入蛋白液,，加入的多少，以不超過(guò)管頂?shù)陌拙€為準(zhǔn),。操作要輕,，加入蛋白液前，超濾管需要插在冰上預(yù)冷,。

(3)平衡,。質(zhì)量和重心二者都要達(dá)到平衡。注意轉(zhuǎn)速和加速度不可太快,，否則直接損壞超濾膜,。開(kāi)始離心超濾(離心機(jī)預(yù)冷至4度)。不同離心機(jī)的轉(zhuǎn)速 rpm換算成g之后,，有所不同,。離心機(jī)的加速度調(diào)至低檔，減小對(duì)膜的壓力,。注意,，一定要等離心機(jī)達(dá)到目的轉(zhuǎn)速之后，方可離開(kāi)離心機(jī),，否則離心機(jī)出問(wèn)題時(shí),，無(wú)法第一時(shí)間處理。膜與轉(zhuǎn)軸的方向根據(jù)說(shuō)明書(shū)調(diào)整(角轉(zhuǎn)離心機(jī)的情況是膜與軸垂直),。在實(shí)際使用中,，一般轉(zhuǎn)速開(kāi)的比說(shuō)明書(shū)里的要低，這樣可以延長(zhǎng)離心管的使用壽命,。

(4)當(dāng)濃縮到剩下1ml時(shí),，取50ul緩沖溶液，加入10ul流穿,，看有沒(méi)變藍(lán)色,，以此判斷超濾管是否漏掉蛋白。如果管漏了,，將上層和流穿重新倒入新管中開(kāi)始超濾,。要精確判斷是否漏管，用5mgml的BSA離心10min,，再取流穿,，跑蛋白膠或Bradford粗測(cè)，繼續(xù)加入剩下的蛋白液濃縮(在冰上操作,，防止蛋白受熱),，直到所有濃縮液都加完為止,。離心過(guò)程中注意是否發(fā)生蛋白沉淀，導(dǎo)致堵管,。若發(fā)生沉淀,，要確定沉淀的具體原因，是蛋白濃度過(guò)高還是Buffer不合適;前者可用多根超濾管同時(shí)超濾,，降低濃度的辦法解決,，后者的方法是換不同的緩沖溶液，直到蛋白不發(fā)生沉淀為止,。

(5)前面幾步用以濃縮蛋白,，如果要換Buffer，在總蛋白液濃縮至1ml左右的時(shí)候,，輕輕加入新的Buffer(經(jīng)0.22um超濾膜超濾),，再濃縮至1ml左右，連續(xù)三次,，最后一次的濃縮終體積根據(jù)需要的蛋白濃度而定,，一般不多于500ul，也有濃縮至200ul以內(nèi)的情況,。按照每次至少10倍左右的體積濃縮算,，三次達(dá)到1000倍以上，基本上可以達(dá)到換buffer的目的,。