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細胞爬片的準(zhǔn)備
1、蓋玻片的選擇:
爬片可用一般的蓋玻片,,也可用專用細胞爬片(價格比較昂貴)但是細胞貼壁牢固,,拍出照片效果好。
2,、爬片的剪裁:
可根據(jù)自己的需要,,到染色時再將之切開,這樣既保證了細胞均一性,,又可同時做幾個指標(biāo)的染色剪裁成合適大小,,置于6孔板、12孔板或24孔板,。
3,、爬片的使用前處理:
將剪裁好的爬片,置于濃硫酸中浸泡并過夜,,第二天先用自來水沖洗20遍,,再置于無水酒清中浸泡6小時,,再用三蒸水沖洗3遍,。
細胞爬片的操作
1,、胰酶消化細胞后計數(shù)重懸細胞于培養(yǎng)基中。
2,、加細胞前,,根據(jù)玻片的大小,先在每個孔里準(zhǔn)備放爬片的位置滴少量培養(yǎng)基,,使玻片與培養(yǎng)皿靠培養(yǎng)基的張力粘合到一起,,然后放玻片,防止加細胞懸液時玻片漂起,,造成雙層細胞貼片,。
3、根據(jù)自己的需要選擇合適的細胞密度接入培養(yǎng)板內(nèi)即可,。
4,、待細胞貼壁后,可去上清加含藥培養(yǎng)基,。
5,、按照實驗設(shè)計,作用一定時間后取玻片,。
取玻片時由于玻片與培養(yǎng)皿底結(jié)合較緊,,張力較大,一般將注射器針頭針尖向背面弄個小鉤,,這樣將爬片輕輕勾起,,用小鑷子取出就可以了。
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