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牛血清白蛋白(BSA)在生化實(shí)驗(yàn)中有廣泛的應(yīng)用, 接下來(lái)為大家介紹其中兩種作用,。
牛血清白蛋白測(cè)定蛋白濃度:
按50:1配置BCA工作液。10ulC液(蛋白標(biāo)準(zhǔn))+90ulPBS液稀釋成0.5mg/ml的蛋白標(biāo)準(zhǔn)液,。
再分別以0,、1、2,、4,、8、12,、16,、20ul將蛋白標(biāo)準(zhǔn)液加入96孔板的第1~8標(biāo)準(zhǔn)孔中,在其他樣品孔中加入10ul待測(cè)樣品,。分別加PBS定容至20ul,。各孔中加入200ulBCA工作液,室溫放置2小時(shí),。用酶標(biāo)儀測(cè)定蛋白濃度:測(cè)定A562,,依標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)算出蛋白濃度。
牛血清白蛋白SDS-PAGE電泳
1,、制膠:按比例配制分離膠,,緩緩地?fù)u動(dòng)溶液,使激活劑混合均勻,,將凝膠溶液平緩地注入兩層玻璃J中,,再在液面上小心注入一層水,以阻止氧氣進(jìn)入凝膠溶液中,,靜置40min,。
同前按比例配制濃縮膠,但混勻溶液時(shí)不要過(guò)于劇烈以免引入過(guò)多地氧氣,。
吸去不連續(xù)系統(tǒng)中下層分離膠上的水分,,連續(xù)平穩(wěn)的注入凝膠溶液,然后小心插入梳子并注意不得在齒尖留有氣泡,,靜制60min以上以保證聚合,。
2、預(yù)電泳:將聚合好的凝膠安置于電泳槽中,,小心拔去梳子,,加入電泳緩沖液后低電壓10-20V的預(yù)電泳20-30min。
3,、樣品準(zhǔn)備:首先計(jì)算上樣體積,,然后按樣品上樣buffer=4:1的比例加入上樣bufer混勻,沸水10分鐘,,冰上5分鐘,。
4、加樣:預(yù)電泳后依次加入標(biāo)準(zhǔn)品(Marker)和待分析樣品,。(加樣時(shí)間要盡量短,,以免樣品擴(kuò)散,可在未加樣的孔中加入等量的樣品緩沖液避免邊緣效應(yīng),。)每個(gè)泳道加5ul ,。
5、電泳:加樣完畢,,選擇80V恒壓進(jìn)行電泳,,電泳直至溴酚藍(lán)染料前沿到達(dá)兩膠交界處(約20分鐘),更換至100V恒壓電泳,,電泳直至溴酚藍(lán)染料前沿下至凝膠末端處,,即停止電泳(約1小時(shí)20分鐘)。
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