一、ELISA是什么,？

ELISA是酶聯(lián)免疫吸附測定法 (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay , ELISA) 的簡稱,。它是在免疫酶技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新型的免疫測定技術(shù) 。

ELISA是一種廣泛應(yīng)用在測定液體樣本中的蛋白,、抗體,、或激素的免疫分析技術(shù)。酶聯(lián)免疫吸附試驗的標準程序,，通常是把蛋白,、抗體、或激素等（即抗原）直接或是以捕捉抗體（capture Ab）固定在固相載體上,，再加入一級檢測抗體（primarydetection Ab）,，形成一個抗原抗體的復(fù)合物。如果該抗體已經(jīng)用酶（enzyme）標記了,，即可用來直接測定抗原的量,，若無，則可利用另一個酶標記的二級抗體來測定抗原的量,。測定抗原量的方法是加入該酶的底質(zhì)（substrate）,，作用后產(chǎn)生出現(xiàn)的顏色深淺和樣本中的抗原量呈正比的關(guān)系，依此原理計算出樣本中的抗原總量或濃度

二,、ELISA通常分為四種類型：直接法、間接法,、競爭法,、夾心法等

1.直接法（Direct ELISA）僅需要抗原和酶標一抗，操作簡便,，可避免交叉反應(yīng),，然而該方法要求酶標一抗有較高的特異性要求，同時也并非所有的一抗適合標記處理,。直接法在實際運用中并不多見,，它并不能對樣本中抗體進行定量分析,，因為樣本中抗體是非酶標抗體,，無法進行后續(xù)顯色。該法經(jīng)過改進就是競爭法。

2.間接法（Indirect ELISA）使用了二抗增加信號強度,，也使抗體的選擇多樣化,，然而間接法容易產(chǎn)生交叉反應(yīng),。間接法只能用于測定抗體,，主要用于疾病的診斷,，其優(yōu)點是只需要改變包被抗原，酶標抗體是通用的,。

3.夾心法（Sandwich ELISA）分為雙抗體夾心法和雙抗原夾心法：

①雙抗體夾心法中抗原被兩個抗體——捕捉抗體和檢測抗體,，結(jié)合于不同位點。捕捉抗體固定于載體上,，檢測抗體通過結(jié)合抗原進行顯色分析,。應(yīng)用于雙抗體夾心法檢測的抗體需是單抗,，而且對同一抗原結(jié)合位點不同,，如此才能避免交叉反應(yīng)或兩種抗體競爭性結(jié)合同一位點,。夾心法具有高靈敏度、高專一性的優(yōu)勢,，但該法只適用于有多個結(jié)合位點的抗原檢測,，主要用于檢測各種大分子抗原——例如在醫(yī)學(xué)檢測中測定HBsAg,、HBeAg,、AFP等。由于雙抗體夾心法特異性高,，在檢測過程中有時會將樣本和酶標抗體同時加入進行反應(yīng)（一步法），此時如果樣本中抗原含量過高會導(dǎo)致其與固相抗體和酶標抗體均有結(jié)合而  不形成“夾心復(fù)合物"，此時測出的結(jié)果將低于實際含量甚至是陰性結(jié)果（鉤狀效應(yīng)hook ffect）。因此,，如果使用一步法測定樣本中抗原含量時要注意測量的線性范圍，另外使用高親和力的單抗也可削弱鉤狀效應(yīng),。

②雙抗原夾心法中抗原被包被于固相,，檢測樣本中的抗體結(jié)合于抗原后,，使用酶標的抗原進行結(jié)合及后續(xù)反應(yīng)，可以用來測定樣本中的抗體,。雙抗原夾心法的關(guān)鍵在于酶標抗原的制備,，需要根據(jù)抗原結(jié)構(gòu)進行設(shè)計，在醫(yī)學(xué)檢驗上測定抗HBsAg抗體采用的就是此法,，檢測時被測樣本不需要稀釋即可直接進行測定，故此靈敏度相對而言高于間接法,。

4.競爭法（Competitive ELISA）是用樣本中的游離抗體/抗原與固相的酶標抗體/抗原競爭性結(jié)合的分析方法。當(dāng)游離抗體（或抗原）濃度越高,，則能與固定抗原（或抗體）結(jié)合的酶標抗體（或抗原）就越少,，后續(xù)顯色就越淺,，即與對照相比，顯色越淺,，表示檢測樣本中抗體（或抗原）含量越高,。該法適合比較不純的樣本,，且重復(fù)性好,，但是檢測的靈敏度和專一性較差。競爭法測抗體常常用于檢測某些干擾物質(zhì)不易去除的樣本及難以純化得到抗原等情況,。競爭法測抗原常用于檢測小分子抗原及半抗原,，這類抗原通常缺乏兩個以上的識別位點,，不適用于雙抗夾心法進行測定,。