硝酸纖維素膜又稱為NC膜， 在膠體金試紙中用做C/T線的承載體,，同時也是免疫反應(yīng)的發(fā)生處,。所以NC膜成為該試驗中最重要的耗材
 

NC膜、PVDF膜的選擇

western blot 中膜的選擇是實驗成功的關(guān)鍵點,，Western blot實驗中一般可以選擇硝酸纖維素膜(NC) 和PVDF膜,，那NC膜和PVDF膜有什么區(qū)別呢？怎樣才能選擇最恰當?shù)碾s交膜進行Western blot實驗呢,？

Western Blot時該選擇NC膜還是PVDF膜?

硝酸纖維素膜：硝酸纖維素膜（NC膜）是蛋白印跡實驗的標準固相支持物,。在低離子轉(zhuǎn)移緩沖 液的環(huán)境下，大多數(shù)帶負電荷的蛋白質(zhì)會與硝酸纖維素膜發(fā)生疏水作用而高親和力的結(jié)合在一起,，雖然這其中的機制還不是十分清楚,，但由于硝酸纖維素膜（NC膜）的這個特性,，而且易于封閉非特異性結(jié)合，從而得到了廣泛的應(yīng)用,。

在非離子型的去污劑作用下,，結(jié)合的蛋白還可以被洗脫下來。根據(jù)被轉(zhuǎn)移的蛋白分子量大小,，要選擇不同 孔徑的硝酸纖維素膜（NC膜）,。因為隨著膜孔徑的不斷減小，膜對低分子量蛋白的結(jié)合就越牢固,。但是膜孔徑如果小于0.1mm,，蛋白的轉(zhuǎn)移就很難進行了。因此,，我們通 常用0.45μm和0.2μm兩種規(guī)格的硝酸纖維素膜,。大于20kD的蛋白就可以用0.45μm的膜，小于20kD的蛋白就要用0.2μm的膜了,，如果用 0.45μm的膜就會發(fā)生“Blowthrough"的現(xiàn)象,。從膜的質(zhì)地上來看，最重要的指標就是單位面積上能夠結(jié)合的蛋白的量,。

硝酸纖維素膜（NC膜）的結(jié)合能力主要與膜的硝酸纖維素的純度有關(guān),，市場上有些硝酸纖維素膜（NC膜）通常會還有大量的醋酸纖維素，因而降低了蛋白的結(jié)合量,。如果采用的是100%純度的硝酸纖維素,， 保證了最大的蛋白結(jié)合量，可達80-150μg/cm2,。由于100%的純度，因而也大大減少了非特異性的結(jié)合,，降低雜交背景,，無 需高嚴謹度的洗脫步驟。其次,，膜的強度和韌性也是需要考慮的因素,。常規(guī)的硝酸纖維素膜比較脆，漂洗一兩次就會破損,，不能反復使用,。

PVDF轉(zhuǎn)移膜：PVDF是一種高強度、耐腐蝕的物質(zhì),，通常是用來制造水管的,。 PVDF膜可以結(jié)合蛋白質(zhì)，而且可以分離小片段的蛋白質(zhì),，最初是將它用于蛋白質(zhì)的序列測定,，因為硝酸纖維素膜在Edman試劑中會降解，所以就尋找了 PDVF作為替代品，雖然PDVF膜結(jié)合蛋白的效率沒有硝酸纖維素膜高,，但由于它的穩(wěn)定,、耐腐蝕使它成為蛋白測序理想的用品，一直沿用至今,。PVDF膜與 硝酸纖維素膜一樣,，可以進行各種染色和化學發(fā)光檢測，也有很廣的適用范圍,。這種PVDF膜,，靈敏度、分辨率和蛋白親和力在精細工藝下比常規(guī)的膜都要高,，非 常適合于低分子量蛋白的檢測,。但PVDF膜在使用之前必需用純甲醇進行浸泡飽和1-5秒鐘。

使用PVDF膜時,，一定要先用無水甲醇預處理,，再在transfer buffer中平衡好才可以使 用(PVDF膜用甲醇泡的目的是為了活化PVDF膜上面的正電基團，使它更容易跟帶負電的蛋白質(zhì)結(jié)合),。經(jīng)過預處理的PVDF膜在轉(zhuǎn)膜時,， 可以使用不含甲醇的transfer buffer。而使用NC膜時,，有的需要用無水甲醇處理,，有的則不必，直接用transfer buffer平衡好就可以了,。