RIPA主要是從動物組織和動物細(xì)胞中抽取的可溶性蛋白,。
RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一種傳統(tǒng)的細(xì)胞組織快速裂解液,。RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規(guī)的Western、IP等。
RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay,。RIPA裂解液的配方有很多種，根據(jù)其裂解液的強(qiáng)度大致可以分為強(qiáng),、中,、弱三類。

成分：
RIPA裂解液(強(qiáng))的主要成分為50mM Tris(pH 7.4),，150mM NaCl,，1%TritonX-100，1% sodium deoxycholate,，0.1% SDS,，以及2mM sodium pyrophosphate，25mM β-glycerophosphate,，1mM EDTA,，1mM Na3VO4，0.5 ug/ml leupeptin等多種抑制劑,?？梢杂行б种频鞍捉到狻?br style="box-sizing: border-box;"/>RIPA裂解液(中)的主要成分為50mM Tris(pH 7.4),，150mM NaCl,，1% NP-40，0.5% sodium deoxycholate,。

使用方法：
對于培養(yǎng)細(xì)胞樣品：
1. 融解RIPA裂解液,，混勻。取適當(dāng)量的裂解液,，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF,，使PMSF的最終濃度為1mM。
2.對于貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液,，用PBS,、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不洗),。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液,。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸,。通常裂解液接觸細(xì)胞1-2秒后,，細(xì)胞就會被裂解。
對于懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞,，用手指把細(xì)胞用力彈散,。按照6孔板每孔細(xì)胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀,。如果細(xì)胞量較多,，必需分裝成50-100萬細(xì)胞/管，然后再裂解,。

裂解液用量說明：通常6孔板每孔細(xì)胞加入150微升裂解液已經(jīng)足夠,，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到200微升或250微升。

對于組織樣品：
1. 把組織剪切成細(xì)小的碎片,。
2. 融解RIPA裂解液,，混勻。取適當(dāng)量的裂解液,，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF,，使PMSF的最終濃度為1mM。
3. 按照每20毫克組織加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液,。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液,，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量,。)
4. 用玻璃勻漿器勻漿,，直至充分裂解。
5. 充分裂解后,，10000-14000g離心3-5分鐘,，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE,、Western和免疫沉淀等操作,。
6. 如果組織樣品本身非常細(xì)小，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解,，通過強(qiáng)烈vortex使樣品裂解充分,。然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實驗,。直接裂解的優(yōu)點是比較方便,，不必使用勻漿器，缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分,。

注：RIPA裂解液的裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會出現(xiàn)一小團(tuán)透明膠狀物,，屬正常現(xiàn)象,。該透明膠狀物為含有基因組
DNA等的復(fù)合物,。在不檢測和基因組DNA結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下，可以直接離心取上清用于后續(xù)實驗,；如果需要檢測和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白,，則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物,，隨后離心取上清用于后續(xù)實驗。如果檢測一些常見的轉(zhuǎn)錄因子,，例如NFκB,、p53等時，通常不必進(jìn)行超聲處理,，就可以檢測到這些轉(zhuǎn)錄因子,。