氨基酸,,是含有堿性氨基和酸性羧基的有機(jī)化合物,。羧酸碳原子上的氫原子被氨基取代后形成的化合物,。
氨基酸分子中含有氨基和羧基兩種官能團(tuán),。
與羥基酸類似,氨基酸可按照氨基連在碳鏈上的不同位置而分為α-,,β-,,γ-,w-...氨基酸,,但經(jīng)蛋白質(zhì)水解后得到的氨基酸都是α-氨基酸,,而且僅有二十二種,包括甘氨酸,、丙氨酸,、纈氨酸、亮氨酸,、異亮氨酸,、甲硫氨酸(蛋氨酸),、脯氨酸、色氨酸,、絲氨酸,、酪氨酸、半胱氨酸,、苯丙氨酸,、天門冬酰胺、谷氨酰胺,、蘇氨酸,、天冬氨酸、谷氨酸,、賴氨酸,、精氨酸、組氨酸,、硒半胱氨酸和吡咯賴氨酸(僅在少數(shù)細(xì)菌中發(fā)現(xiàn)),,它們是構(gòu)成蛋白質(zhì)的基本單位。
氨基酸是構(gòu)成動物營養(yǎng)所需蛋白質(zhì)的基本物質(zhì),。
物理性質(zhì)
氨基酸為無色晶體,,熔點(diǎn)超過200℃,比一般有機(jī)化合物的熔點(diǎn)高很多,。α-氨基酸有酸,、甜,、苦,、鮮4種不同味感。谷氨酸單鈉和甘氨酸是用量最大的鮮味調(diào)味料,。氨基酸一般易溶于水,、酸溶液和堿溶液中,不溶或微溶于乙醇或乙.醚等有機(jī)溶劑,。氨基酸在水中的溶解度差別很大,,例如酪氨酸的溶解度最小,25℃時,,100g水中酪氨酸僅溶解0.045g,,但在熱水中酪氨酸的溶解度較大。賴氨酸和精氨酸常以鹽酸鹽的形式存在,,因為它們極易溶于水,,因潮解而難以制得結(jié)晶。
(1)色澤和顏色:各種常見的氨基酸易成為無色結(jié)晶,,結(jié)晶形狀因氨基酸的結(jié)構(gòu)不同而有所差異,。如L-谷氨酸為四角柱形結(jié)晶,,D-谷氨酸則為菱形片狀結(jié)晶。
(2)熔點(diǎn):氨基酸結(jié)晶的熔點(diǎn)較高,,一般在200~300℃,,許多氨基酸在達(dá)到或接近熔點(diǎn)時會分解成胺和CO2。
(3)溶解度:絕大部分氨基酸都能溶于水,。不同氨基酸在水中的溶解度有差別,,如賴氨酸、精氨酸,、脯氨酸的溶解度較大,,酪氨酸、半胱氨酸,、組氨酸的溶解度很小,。各種氨基酸都能溶于強(qiáng)堿和強(qiáng)酸中。但氨基酸不溶或微溶于乙醇,。
(4)味感:氨基酸及其衍生物具有一定的味感,,如酸、甜,、苦,、咸等。其味感的種類與氨基酸的種類,、立體結(jié)構(gòu)有關(guān),。從立體結(jié)構(gòu)上講,一般來說,,D-型氨基酸都具有甜味,,其甜味強(qiáng)度高于相應(yīng)的L-型氨基酸。
(5)紫外吸收特性:各種常見的氨基酸對可見光均無吸收能力,。但酪氨酸,、色氨酸和苯丙氨酸在紫外光區(qū)具有明顯的光吸收現(xiàn)象。而大多數(shù)蛋白質(zhì)中都含有這3種氨基酸,,尤其是酪氨酸,。因此,可以利用280nm波長處的紫外吸收特性定量檢測蛋白質(zhì)的含量,。
氨基酸的一個重要光學(xué)性質(zhì)是對光有吸收作用,。20種Pr-AA在可見光區(qū)域均無光吸收,在遠(yuǎn)紫外區(qū)(<220nm)均有光吸收,,在紫外區(qū)(近紫外區(qū))(220nm~300nm)只有三種AA有光吸收能力,,這三種氨基酸是苯丙氨酸、酪氨酸,、色氨酸,,因為它們的R基含有苯環(huán)共軛雙鍵系統(tǒng),。
苯丙AA最大光吸收在259nm、酪AA在278nm,、色AA在279nm,,蛋白質(zhì)一般都含有這三種AA殘基,所以其最大光吸收在大約280nm波長處,,因此能利用分光光度法很方便的測定蛋白質(zhì)的含量,。分光光度法測定蛋白質(zhì)含量的依據(jù)是朗伯—比爾定律。在280nm處蛋白質(zhì)溶液吸光值與其濃度成正比,。
化學(xué)性質(zhì)
氨基的反應(yīng):?;磻?yīng);與亞硝酸反應(yīng),;與醛反應(yīng),;磺酰化反應(yīng),;與DNFB反應(yīng),;成鹽反應(yīng)。
羧基的反應(yīng)氨基酸的羧基和其他羧酸一樣,,在一定條件下可以發(fā)生?;Ⅴセ?、脫羧和成鹽反應(yīng),。
與水合茚三酮反應(yīng):α-氨基酸與水合茚三酮在弱酸性溶液中共熱,經(jīng)氧化脫氨生成相應(yīng)的α-酮酸,,進(jìn)一步脫羧形成醛,,水合茚三酮被還原成還原型茚三酮,在弱酸性溶液中,,還原型茚三酮,、氨基酸脫下來的氨再與另一個水合茚三酮反應(yīng)縮合生成藍(lán)紫色復(fù)合物,脯氨酸和羥脯氨酸與茚三酮反應(yīng)產(chǎn)生黃色物質(zhì),,其余的α-氨基酸與茚三酮反應(yīng)均產(chǎn)生藍(lán)紫色物質(zhì)。這個顏色反應(yīng)常被用于α-氨基酸的比色測定和色層分析的顯色,。
酸堿
1,、兩性解離與等電點(diǎn)
氨基酸在水溶液或結(jié)晶內(nèi)基本上均以兼性離子或偶極離子的形式存在。所謂兩性離子是指在同一個氨基酸分子上帶有能釋放出質(zhì)子的NH3+纈氨酸離子和能接受質(zhì)子的COO-負(fù)離子,,因此氨基酸是兩性電解質(zhì),。
氨基酸的等電點(diǎn):氨基酸的帶電狀況取決于所處環(huán)境的pH值,改變pH值可以使氨基酸帶正電荷或負(fù)電荷,,也可使它處于正負(fù)電荷數(shù)相等,,即凈電荷為零的兩性離子狀態(tài),。使氨基酸所帶正負(fù)電荷數(shù)相等即凈電荷為零時的溶液pH值稱為該氨基酸的等電點(diǎn)。
氨基酸分子中同時含有酸性基團(tuán)和堿性基團(tuán),,因此,,氨基酸既能和較強(qiáng)的酸反應(yīng)。也能與較強(qiáng)的堿反應(yīng)而生成穩(wěn)定的鹽,,具有兩性化合物的特征,。
當(dāng)調(diào)節(jié)某一種氨基酸溶液的pH為一定值時,該種氨基酸剛好以偶極離子形式存在,,在電場中,,既不向負(fù)極移動,也不向正極移動,,即此時其所帶的正,、負(fù)電荷數(shù)相等,凈電荷為零,,呈電中性,,此時此溶液的pH稱為該氨基酸的等電點(diǎn),通常用pI表示,。在等電點(diǎn)時,,氨基酸主要以偶極離子的形式存在。當(dāng)氨基酸溶液的pH大于pI時(如加入堿),,氨基酸中的一NH3+給出質(zhì)子,,平衡右移,這時氨基酸主要以陰離子形式存在,,若在電場中,,則向正極移動。反之,,當(dāng)溶液的pH小于pI時(如加入酸),,氨基酸中的一COO-結(jié)合質(zhì)子,使平衡左移,,這時氨基酸主要以陽離子形式存在,,若在電場中,則向負(fù)極移動,。
各種氨基酸由于其組成和結(jié)構(gòu)的不同,,而具有不同的等電點(diǎn)。中性氨基酸的等電點(diǎn)小于7,,一般為5.0~6.5,。酸性氨基酸的等電點(diǎn)為3左右。堿性氨基酸的等電為7.58~10.8。帶電顆粒在電場的作用下,,向著與其電性相反的電極移動,,稱為電泳。由于各種氨基酸的相對分子質(zhì)量和pI不同,,在相同pH的緩沖溶液中,,不同的氨基酸不僅帶的電荷狀況有差異,而且在電場中的泳動方向和速率也往往不同,。因此,,基于這種差異,可用電泳技術(shù)分離氨基酸的混合物,。例如,,天冬氨酸和精氨酸的混合物置于電泳支持介質(zhì)(濾紙或凝膠)中央,調(diào)節(jié)溶液的pH至6.02(為緩沖溶液)時,,此時天冬氨酸(pI=2.98)帶負(fù)電荷,,在電場中向正極移動,而精氨酸(pI=10.76)帶正電荷,,向負(fù)極移動,。
2、解離常數(shù)
解離式中K1和K2′分別代表α-碳原子上-COOH和-NH3的表現(xiàn)解離常數(shù),。在生化上,,解離常數(shù)是在特定條件下(一定溶液濃度和離子強(qiáng)度)測定的。等電點(diǎn)的計算可由其分子上解離基團(tuán)的表觀解離常數(shù)來確定,。
3,、多氨基(堿性氨基酸)和多羧基(酸性氨基酸)氨基酸的解離
解離原則:先解離α-COOH,隨后其他-COOH,;然后解離α-NH3+,,隨后其他-NH2??傊然怆x度大于氨基,,α-C上基團(tuán)大于非α-C上同一基團(tuán)的解離度。等電點(diǎn)的計算:首先寫出解離方程,,兩性離子左右兩端的表觀解離常數(shù)的對數(shù)的算術(shù)平均值,。一般pI值等于兩個相近pK值之和的一半。如天冬氨酸,、賴氨酸,。
4、氨基酸的酸堿滴定曲線
以甘氨酸為例:摩爾甘氨酸溶于水時,,溶液pH為5.97,分別用標(biāo)準(zhǔn)NaOH和HCl滴定,,以溶液pH值為縱坐標(biāo),,加入HCl和NaOH的摩爾數(shù)為橫坐標(biāo)作圖,,得到滴定曲線。該曲線一個十分重要的特點(diǎn)就是在pH=2.34和pH=9.60處有兩個拐點(diǎn),,分別為其pK1和pK2,。
對應(yīng)密碼子表
密碼子,RNA分子中每相鄰的三個核苷酸編成一組,,在蛋白質(zhì)合成時,,代表某一種氨基酸??茖W(xué)家已經(jīng)發(fā)現(xiàn),,信使RNA在細(xì)胞中能決定蛋白質(zhì)分子中的氨基酸種類和排列次序。也就是說,,信使RNA分子中的四種核苷酸(堿基)的序列能決定蛋白質(zhì)分子中的20種氨基酸的序列,。堿基數(shù)目與氨基酸種類、數(shù)目的對應(yīng)關(guān)系是怎樣的呢,?為了確定這種關(guān)系,,研究人員在試管中加入一個有120個堿基的信使RNA分子和合成蛋白質(zhì)所需的一切物質(zhì),結(jié)果產(chǎn)生出一個含40個氨基酸的多肽分子,??梢姡攀筊NA分子上的三個堿基能決定一個氨基酸,。
結(jié)構(gòu)通式氨基酸是指含有氨基的羧酸,。生物體內(nèi)的各種蛋白質(zhì)是由20種基本氨基酸構(gòu)成的。除甘氨酸外均為L-α-氨基酸(其中脯氨酸是一種L-α-亞氨基酸),,R-α-氨基酸其結(jié)構(gòu)通式如圖1(R基為可變基團(tuán)):
除甘氨酸外,,其它蛋白質(zhì)氨基酸的α-碳原子均為不對稱碳原子(即與α-碳原子鍵合的四個取代基各不相同),因此氨基酸可以有立體異構(gòu)體,,即可以有不同的構(gòu)型(D-型與L-型兩種構(gòu)型)
制備方法
合成
組成蛋白質(zhì)的大部分氨基酸是以埃姆登-邁耶霍夫(Embden-Meyerhof)途徑與檸檬酸循環(huán)的中間物為碳鏈骨架生物合成的,。例外的是芳香族氨基酸、組氨酸,,前者的生物合成與磷酸戊糖的中間物赤蘚糖-4-磷酸有關(guān),,后者是由ATP與磷酸核糖焦磷酸合成的。微生物和植物能在體內(nèi)合成所有的氨基酸,,動物有一部分氨基酸不能在體內(nèi)合成(必需氨基酸),。
必需氨基酸一般由碳水化合物代謝的中間物,經(jīng)多步反應(yīng)(6步以上)而進(jìn)行生物合成的,,非必需氨基酸的合成所需的酶約14種,,而必需氨基酸的合成則需要更多的,約有60種酶參與。生物合成的氨基酸除作為蛋白質(zhì)的合成原料外,,還用于生物堿,、木質(zhì)素等的合成。另一方面,,氨基酸在生物體內(nèi)由于氨基轉(zhuǎn)移或氧化等生成酮酸而被分解,,或由于脫羧轉(zhuǎn)變成胺后被分解。