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Trizol提取RNA的詳細步驟

時間:2022/6/1閱讀:841
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1,、在提取組織RNA時,每50~100mg組織用1ml Trizol試劑對組織進行裂解,;提取細胞RNA時,,先離心沉淀細胞,每5-10╳106個細胞加1ml Trizol后,,反復用槍吹打或劇烈振蕩以裂解細胞,。

2、將組織或細胞的Trizol裂解液轉(zhuǎn)入EP管中,在室溫15~30C下放置5分鐘,;在EP管中,,按照每1mlTRIZOL加0.2ml氯/仿的量加入氯/仿,蓋上EP管蓋子,,在手中用力震蕩15秒,,在室溫下(15℃~30℃)放置2~3分鐘后,12000g(2℃~8℃)離心15分鐘,。

3,、取上層水相置于新EP管中,按照每1mlTRIZOL加0.5ml異丙醇的量加入異丙醇,在室溫下(15℃~30℃)放置10分鐘,12000g(2℃~8℃)離心10分鐘,。

4,、按照每1mlTRIZOL加1ml 75%乙醇進行洗滌,渦旋混合,,7500g(2℃~8℃)離心5分鐘,,棄上清,;讓沉淀的RNA在室溫下自然干燥;用Rnase-freewater溶解RNA沉淀,。

Ps:在收集到生物材料之后,,最好馬上進行RNA制備工作。若需暫時儲存,,則應以液氮將生物材料急速冷凍后,,儲存于-80℃冷凍柜。在制備RNA時,,將儲存于冷凍柜的材料取出,,立即以加入液氮研磨的方式打破細胞,不可以先行解凍,,以避免RNase的作用,。

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