配置

膠原酶溶液同胰蛋白酶一樣配制,、消毒滅菌和儲(chǔ)藏,。
注意：
因?yàn)棰裥湍z原酶分子顆粒比胰酶大，不容易過(guò)濾,，因此可以用蔡式濾器過(guò)濾除菌,。
鈣、鎂離子和血清成分不會(huì)影響膠原酶的消化作用,，因而可用BSS（如D-hanks或者PBS）或含血清的培養(yǎng)液配制,。

使用

1.將漂洗、修剪干凈的組織剪成1~2mm3左右小塊
2.將組織塊放入離心管（三角燒瓶）中加入30~50倍體積的膠原酶溶液,，旋緊蓋子（密封燒瓶）,。
3.將燒瓶放入37℃水浴或者37℃孵箱內(nèi)，每隔3min振搖一次,，如能放在37℃的恒溫震蕩水浴箱中則更好,。
消化時(shí)間與組織的類別有關(guān)，對(duì)于某些腫瘤組織或其他較致密結(jié)締組織,，消化時(shí)間4~48h,，對(duì)于容易消化的組織可以采用37℃震蕩消化15~45min，也可以根據(jù)具體情況而定,。如組織塊已分散而失去塊的形狀,，一經(jīng)搖動(dòng)即成細(xì)胞團(tuán)或單個(gè)細(xì)胞，可以認(rèn)為已消化充分,。上皮組織經(jīng)膠原酶消化后,，由于上皮細(xì)胞對(duì)此酶有耐受性，可能仍有一些細(xì)胞團(tuán)未*分散,，但成團(tuán)的上皮細(xì)胞比分散的單個(gè)上皮細(xì)胞更易生長(zhǎng),，因此，如無(wú)特殊需要可以不必再進(jìn)一步處理,。
4.收集消化液（有時(shí)含個(gè)別組織塊及沒有充分消化的組織碎屑則需用100目不銹鋼網(wǎng)過(guò)濾）,，離心1000r/min，5min,，去除上清,，用Hanks液或者無(wú)血清培養(yǎng)液離心漂洗1~2次，去除上清,，加培養(yǎng)液制成細(xì)胞懸液,，接種培養(yǎng)瓶,。