胰蛋白酶Trypsin (Parenzyme) 為蛋白酶的一種,，EC 3.4.4.4，是從牛,、羊、豬的胰臟提取的一種絲氨酸蛋白水解酶,。在脊椎動物中,，作為消化酶而起作用。在胰臟是胰蛋白酶的前體胰蛋白酶原被合成后,，作為胰液的成分而分泌,，受腸激酶，或胰蛋白酶的限制分解成為活化胰蛋白酶,，是肽鏈內(nèi)切酶,，它能把多肽鏈中賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基側(cè)切斷。它不僅起消化酶的作用,，而且還能限制分解糜蛋白酶原,、羧肽酶原、磷脂酶原等其它酶的前體,，起活化作用,。是特異性*的蛋白酶，在決定蛋白質(zhì)的氨基酸排列中,，它成為*的工具,。

胰蛋白酶的作用是使細胞間的蛋白質(zhì)水解從而使細胞離散。不同的組織或者細胞對胰酶的作用反應(yīng)不一樣,。胰酶分散細胞的活性還與其濃度,、溫度和作用時間有關(guān)，在 pH 為 8.0 ,、溫度為 37℃ 時,，胰酶溶液的作用能力*。使用胰酶時,，應(yīng)把握好濃度,、溫度和時間，以免消化過度造成細胞損傷,。因 Ca2+ ,、 Mg2+ 和血清、蛋白質(zhì)可降低胰酶的活性，所以配制胰酶溶液時應(yīng)選用不含 Ca2+ ,、 Mg2+ 的 BSS ,，如： D-Hanks 液。終止消化時,，可用含有血清培養(yǎng)液或者胰酶抑制劑終止胰酶對細胞的作用,。
1. 稱取胰蛋白酶：按胰蛋白酶液濃度為 0.25 %，用電子天平準確稱取粉劑溶入小燒杯中的雙蒸水（若用雙蒸水需要調(diào) PH 到 7.2 左右）或 PBS （ D-hanks ）液中,。攪拌混勻,，置于 4℃ 內(nèi)過夜。
2. 用注射濾器抽濾消毒：配好的胰酶溶液要在超凈臺內(nèi)用注射濾器（ 0.22 微米微孔濾膜）抽濾除菌,。
3. 分裝成小瓶于 -20℃ 保存以備使用可,。
 

胰蛋白酶-EDTA消化液(Trypsin-EDTA Solution)含 0.25%胰酶和 0.02%EDTA（0.53mM），溶于無鈣鎂平衡鹽溶液中,，經(jīng)過濾除菌,，可以直接用于培養(yǎng)細胞和組織的消化。本產(chǎn)品具有方便快速,、穩(wěn)定安全,、細胞狀態(tài)好等特點。

產(chǎn)品說明：

在組織細胞的體外培養(yǎng)和原代細胞培養(yǎng)中的組織細胞分散（將組織塊制備成單個細胞懸液）以及傳代細胞培養(yǎng)中,，貼壁生長細胞的消化分散均要使用組織細胞消化液,。常用的消化液為胰蛋白酶，EDTA等,，其功能主要是使細胞間的蛋白質(zhì)（如細胞外基質(zhì)）水解,，使組織或貼壁細胞分散成單個細胞，制成細胞懸液用于進一步的實驗,。

使用方法：

1. 貼壁細胞的消化：

a) 吸去培養(yǎng)液,，用無菌的PBS、Hanks液或無血清培養(yǎng)液洗滌細胞一次,，以去除殘余的血清,。

b) 加入少量胰蛋白酶消化液，蓋過細胞即可,，室溫放置1-2分鐘,。不同的細胞消化時間有所不同，對于貼壁牢固的細胞可適當延長消化時間,。

c) 顯微鏡下觀察,，細胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化,；或者用槍吹打細胞發(fā)現(xiàn)細胞剛好可以被吹打下來,。此時吸除消化液,。加入含血清的細胞培養(yǎng)液，吹打下細胞,，即可直接用于后續(xù)實驗,。

d) 如果發(fā)現(xiàn)消化不足，可加入胰蛋白酶消化液重新消化,。

e) 如果發(fā)現(xiàn)細胞消化時間過長,，未及吹打細胞，細胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落,，直接用胰酶細胞培養(yǎng)液把細胞全部吹打下來,。1000-2000g離心1分鐘，沉淀細胞,，盡量去除胰酶細胞消化液后,，加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細胞，即可用于后續(xù)實驗,。

2. 組織的消化：

不同的組織需要消化的時間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜,。

注意事項：

1．由于組織或細胞性質(zhì)不同,，實驗人員應(yīng)依據(jù)具體情況，確定最佳消化時間,；消化細胞時間不宜過長,，否則會影響細胞貼壁和生長狀況；

2．本產(chǎn)品不含抑菌劑,，在使用過程中要特別注意無菌操作,，避免消化液被微生物污染；

3．不宜4℃長期保存,，切忌反復(fù)凍融,，小量使用時建議分裝凍存；

4.  為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套操作,。