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原理:可用于測定抗體,,也可用于檢測杭原,。其基本原理是采用抗原與抗體的特異反響將待測物與酶連接,,然后通過酶與底物發(fā)生顏色反響,,用于定量測定。酶聯(lián)免疫吸附法測定的對象可所以抗體也可所以抗原,。3種必要的試劑:
①固相的抗原或抗體(免疫吸附劑);
②酶符號的抗原或抗體(符號物),;
③酶效果的底物(顯色劑),。
ELISA進程包括:抗原吸附在固相載體上,這個進程稱為包被,,加待測抗體, 再加相應酶符號抗體,,生成抗原--待測抗體--酶符號抗體的復合物,再與該酶的底物反響生成有色產(chǎn)品,。借助分光光度計的光吸收核算抗體的量,。
依據(jù)檢測意圖和操作過程不同,有以下三種類型的常用辦法:
a,、間接法
此法是測定抗體zui常用的辦法,。將已知抗原吸附于固相載體。加人待檢標本(含相應抗體)與之結(jié)合,。洗刷后,,加人酶標抗球蛋白抗體(酶標抗抗體)和底物進行測定。
b,、雙抗體夾心法
酶聯(lián)免疫吸附法此法常用于測定抗原,。將已知抗體吸附于固相載體,加人待檢標本(含相應抗原)與之結(jié)合,。溫育后洗刷,,加人酶標板中。
c,、競爭法
此法可用于抗原和半抗原的定量測定,,也可用于測定抗體。以測定抗原為例,,將特異性抗體吸附于固相載體,。參加待測抗原和一定量的酶標已知抗原,使二者竟爭與固相抗體結(jié)合;通過洗刷分離,,zui后結(jié)合于固相的酶標抗原與待測抗原含量呈負相關(guān)
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