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ELISA試驗(yàn)操作失敗的主要原因

時間:2019/12/16閱讀:1586
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我們知道,,ELISA測定中影響要素較多,,而且其操作中有一定的技術(shù)要求,,在查驗(yàn)中除正常反響外,,有時??梢姷揭恍┻^錯結(jié)果(即假陽性或假陰性),那么致使試驗(yàn)不成功的主要原因有哪些咧,?

 

:標(biāo)本的影響:

溶血標(biāo)本及混有紅細(xì)胞的血清采用ELISA法檢測易發(fā)生假陽性,。或許是溶血血清中含有過氧化酶物質(zhì)(紅細(xì)胞或血紅蛋 白中的亞鐵血紅素),,在洗刷過程中往往難以*洗脫,,它可使H2O2釋放出原生態(tài)氧(O),從而催化底物四甲基聯(lián)苯胺生成可溶性的有色物質(zhì),,即顯藍(lán)色,,發(fā)生假陽性。所以嚴(yán)峻溶血標(biāo)本禁用,。  

  

二,、標(biāo)本受細(xì)菌污染:

因菌體中或許含有內(nèi)源性辣根過氧化物酶,,因而,被細(xì)菌污染的標(biāo)本同溶血標(biāo)本相同,,亦可發(fā)生非特異性顯色而攪擾 測定結(jié)果,。

 

三、標(biāo)本保存不妥:

在冰箱中保存過久的標(biāo)本,,在間接法ELISA測定中會導(dǎo)致本底過深,、形成假陽性;為克服上述攪擾,,ELISA試劑盒測定的血清標(biāo)本宜為新鮮收集,;如不能立即測定,5d內(nèi)測定的血清標(biāo)本可存放于4℃,,1周后測定的血清標(biāo)本應(yīng)低溫凍存,;凍存后融解的標(biāo)本,蛋白質(zhì)部分濃縮,,分布不均,,應(yīng)充沛混合后再測定,但混勻時應(yīng)輕柔,,不可強(qiáng)烈振動,。    

 

四、標(biāo)本凝結(jié)不全:

在工作中,,有時為了爭取時間快速檢測,,常在血液還未開始凝結(jié)時即強(qiáng)行離心別離血清,使血清中仍殘留部分纖維蛋白原,,在ELISA測定過程中能夠形成肉眼可見的纖維蛋白塊,,易形成假陽性結(jié)果;因而血液標(biāo)本收集后有必要使其充沛凝結(jié)后再別離血清,。

 

 

 

 

 

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