小鼠孕酮(PROG)酶聯(lián)免疫

              檢測試劑盒使用說明書             AE90627Mu

使用前仔細(xì)閱讀本說明書,。本酶聯(lián)免疫試劑盒是基于雙抗體夾心技術(shù)原理，來檢測小鼠孕酮(PROG),，只能用于研究用途,，不得用于醫(yī)學(xué)診斷,。

用  途：用于小鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中孕酮(PROG)測定,。

工作原理：

本試劑盒采用的是生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定樣品中小鼠孕酮(PROG)水平,。向預(yù)先包被了小鼠孕酮(PROG)單克隆抗體的酶標(biāo)孔中加入小鼠孕酮(PROG)，溫育,；溫育后,，加入生物素標(biāo)記的抗PROG抗體。再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合,，形成免疫復(fù)合物,，再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶,，然后加入底物A,、B，產(chǎn)生藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色,。顏色的深淺與樣品中小鼠孕酮(PROG)的濃度呈正相關(guān)。

試劑盒組成：

需要而未提供的試劑和器材：

1. 37℃恒溫箱,。
2. 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀,。
3. 精密移液器及一次性吸頭
4. 蒸餾水，
5. 一次性試管
6. 吸水紙

注意事項(xiàng)：

1. 從2-8℃取出的試劑盒,，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘,。酶標(biāo)包被板開封后如未用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2. 各步加樣均應(yīng)使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,，以避免試驗(yàn)誤差
3. 嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
4. 為避免交叉污染,，要避免重復(fù)使用手中的吸頭和封板膜,。
5. 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用,。保質(zhì)前使用,。
6. 底物B對光敏感，避免長時(shí)間暴露于光下,。

洗板方法：

手工洗板方法：甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體,；在實(shí)驗(yàn)臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次,；將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內(nèi),，浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要,，重復(fù)此過程數(shù)次,。

自動(dòng)洗板：如果有自動(dòng)洗板機(jī),，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過程中

標(biāo)本要求：

1．不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

2．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),，可將標(biāo)本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

操作程序：

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：(本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋,。)

1. 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔,。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
2. 加樣：1）空白孔,，空白對照孔不加樣品,，生物素標(biāo)記的抗PROG抗體，鏈霉親和素-HRP,，只加顯色劑A&B和終止液,，其余各步操作相同；2）標(biāo)準(zhǔn)品孔：加入標(biāo)準(zhǔn)品50ul,，鏈霉親和素-HRP50ul(標(biāo)準(zhǔn)品中已事先整合好生物素抗體,，故不加)；3）待測樣品孔：加入樣本40ul,，然后各加入抗PROG抗體10ul,、鏈霉親和素-HRP50ul，蓋上封板膜,，輕輕震蕩混勻,，37℃溫育60分鐘,。
3. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用,。
4. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去,，如此重復(fù)5次,，拍干,。
5. 顯色：每孔先加入顯色劑A50ul,，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.
6. 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
7. 測定：以空白空調(diào)零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應(yīng)在加終止液后10分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
8. 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對應(yīng)的OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程,，再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計(jì)算出對應(yīng)的樣品濃度,。也可以使用各種應(yīng)用軟件來計(jì)算。

操作程序總結(jié)：

試劑盒性能：

1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.92以上,。

2.批內(nèi)與批間應(yīng)分別小于9%和15%

檢測范圍：

檢測范圍：100pmol/L→3500pmol/L。

保存條件及有效期：

保存：2-8℃,。

有效期：6個(gè)月(2-8℃),。